H9c2(2-1)大鼠心肌細胞
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以下是細胞的訂購信息:
產(chǎn)品名稱:H9c2(2-1)大鼠心肌細胞
英文名稱:H9c2 (2-1) in myocardial cells of rats
規(guī)格:5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號:BH-C3007
培養(yǎng)基:DMEM+10%FBS+1%P/S
運輸和保存:
視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
注意事項:
實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉(zhuǎn)10分鐘后,才開始實驗操作;每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面;
操作間隔應讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)10分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作;無菌操作工作區(qū)域應保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應在抬面之中央無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作;
小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
工作人員應注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應特別小心操作,并選擇適當?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少ClassⅡ)。操作過程中,應避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
操作流程:
1.1 主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%胰酶消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞,以0.25%胰酶消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100%,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用胰酶消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d,繪制細胞生長曲線
MTTP 微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運蛋白
Monoacylglycerol Lipase 單酰甘油脂肪酶抗體
n-Myc 致癌基因n-Myc抗體
MRP3 多藥耐藥相關蛋白3抗體
MTERF1 線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子1抗體
Mst2 蛋白激酶MST2抗體
MSY2 DNA結(jié)合蛋白C抗體
MUC5AC 胃粘液素抗體
MSH gamma 促黑細胞激素γ抗體
單極紡錘體蛋白激酶1抗體
FGFBP3重組人 FGFBP3 蛋白 (His 標簽) Protein
ADM重組人 ADM / Adrenomedullin 蛋白 (Fc 標簽) Protein
UBA1重組人 UBE1 / UBA1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
IFITM3重組人 IFITM3 蛋白 (Fc 標簽) Protein
UBE2L6重組人 UBCH8 / UBE2L6 蛋白 (His 標簽) Protein
GPX7重組人 GPX7 / Glutathione Peroxidase 7 蛋白 (Fc 標簽) Protein
PA2G4重組人 EBP1 / PA2G4 蛋白 (His 標簽) Protein
CST9L重組人 CST9L / Testatin 蛋白 (Fc 標簽) Protein
CLPS重組人 CLPS / Colipase 蛋白 (His 標簽) Protein
MSN重組人 MSN / Moesin 蛋白 (aa 1-346, His 標簽) Protein
ADIPOQ重組人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (Fc 標簽) Protein
KDR重組人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
IL36G重組ARH9c2(2-1)大鼠心肌細胞人 IL36G / IL1F9 蛋白 (aa 18-169, His 標簽) Protein
AMPK重組人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白 Protein
TEK重組人 Tie2 / CD202b / TEK 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
EPHA7重組人 EphA7 / EHK3 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
AMPK重組人 AMPK (G1/B2/A1) Heterotrimer 蛋白 Protein
AMPK重組人 AMPK (G1/B2/A2) Heterotrimer 蛋白 Protein