【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：偽狂-犬病毒通用型(PRV-gB)熒光PCR檢測(cè)試劑盒

Name ：Pseudorabies Virus gB gene Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】50T/盒

【預(yù)期用途】

偽狂-犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)又稱豬皰-疹病毒Ⅰ型、傳-染性延髓麻-痹病毒、奇癢癥病毒、奧葉茲基氏病病毒。是引起牛、羊、豬、犬和貓等多種家畜和野生動(dòng)物發(fā)熱、奇癢(豬除外)及腦脊髓炎為主要癥-狀的皰-疹病毒[1]。豬是偽狂-犬病的*自然宿主，對(duì)其危害大?？芍氯?娠母豬流-產(chǎn)，產(chǎn)死-胎及胎兒干尸化。對(duì)初生仔豬則引起神經(jīng)癥-狀，出現(xiàn)運(yùn)-動(dòng)失-調(diào)，麻-痹，衰竭死亡，病死率 。成年豬多呈隱性感染，但可引起呼-吸道癥-狀[2]。病豬、帶毒豬及帶毒鼠類是本病的主要傳染源，病毒主要從病豬的鼻分泌物、唾液、乳汁和尿中排除，有的帶毒豬可持續(xù)排-毒一年。

本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光 PCR 原理，檢測(cè)偽狂-犬病毒，對(duì)偽狂-犬病毒引起的疾病及其并--發(fā)癥的診斷及療-效評(píng)估有重要指導(dǎo)意義。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒針對(duì)偽狂-犬病毒gB基因高度保守區(qū)基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針[3]。在反應(yīng)體系中含偽狂-犬病毒gB基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放 熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性、定量分析。

【試劑組成】

名 稱	規(guī) 格
核酸提取液	1.5mL×2 管
酶液	50μL×1 管
PRV-gB 反應(yīng)液	1.0mL×1 管
PRV-gB 陽(yáng)性質(zhì)控品	50μL ×1 管
陰性質(zhì)控品	250μL ×1 管

偽狂-犬病毒通用型(PRV-gB)熒光PCR檢測(cè)試劑盒【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從 3 個(gè)丌同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取

0. 5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中，8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；分泌物棉拭子直接取 100μL 提??；血液取血清 100μL 提取。

1.2 DNA 提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000

rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的 DNA 提取試劑盒

（離心柱提取法），請(qǐng)按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽(yáng)性對(duì)照；樣本總數(shù)每滿 7 份，則多配制 1 頭份 PCR 反應(yīng)液)，單個(gè)測(cè)試反應(yīng)液體系配制如下表：

試劑	PRV-gB 反應(yīng)液	酶液
用量（樣本數(shù)為 N）	20μL	1μL

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 DNA、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測(cè)通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）

NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

步驟	循環(huán)數(shù)	溫度	時(shí)間	收集熒光信號(hào)
1	1 cycle	95℃	10min	否
2	40 cycles	94℃	15sec	否
		55℃	30sec	是

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、

stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽(yáng)性：檢測(cè)通道 Ct 值≤35.0，丏明顯的擴(kuò)增曲線。

可疑：檢測(cè)通道 Ct 值>35.0，丏出現(xiàn)明顯曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果如果同樣出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線則為陽(yáng)性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測(cè)結(jié)果無(wú) Ct 值丏無(wú)明顯的擴(kuò)增曲線。

6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性對(duì)照：無(wú)明顯擴(kuò)增曲線或無(wú) Ct 值顯示；

陽(yáng)性對(duì)照：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長(zhǎng)期，丏 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無(wú)效。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)丌超過(guò) 5 次，有效期 12 個(gè)月。

偽狂-犬病毒通用型(PRV-gB)熒光PCR檢測(cè)試劑盒【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】

病死或撲殺的豬，取腦、淋巴結(jié)、*、肺臟等組織；待檢活豬，用棉拭子取鼻腔分泌物、唾液、乳汁等，置于 50%甘油生理鹽水中，或用注射器取血 5mL。

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃，但丌能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

【參考文獻(xiàn)】

[1] 婁高明，杜偉賢．偽狂-犬病流行概況及豬場(chǎng)防制策略[Ｊ]．中國(guó)動(dòng)物檢疫，1999， 16（5）：43－45.

[2] 殷震，劉景華．動(dòng)物病毒學(xué)[Ｍ]．北京：科學(xué)出版社，1997.

[3] 朱淑芬,朱瑞良,喬彩霞.檢測(cè)偽狂-犬病毒ｇＢ基因熒光定量ＰＣＲ方法的建立[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，32（10）:1413-1417.

產(chǎn)品圖片：

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

生產(chǎn)地址：金海公路3265號(hào)14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的偽狂-犬病毒通用型(PRV-gB)熒光PCR檢測(cè)試劑盒質(zhì)量高，價(jià)格低，售后有保證。為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。

本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

偽狂-犬病毒通用型(PRV-gB)熒光PCR檢測(cè)試劑盒相關(guān)產(chǎn)品：

牛結(jié)核分枝桿菌(MB)核酸-檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?

牛副結(jié)核分枝桿菌(MPB)核酸-檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探