泉州市睿信生物科技有限公司是集研發(fā)、生產、銷售、服務及品牌代理為一體的生物技術公司，目前可提供各種抗體、免疫學試劑盒、生化試劑、分子生物學試劑等高品質產品及服務，涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學領域。

睿信生物擁有完善的技術服務團隊，嚴格的技術服務流程，獲得客戶的一致好評。

 我們可以根據您的應用需要，比如在檢測范圍、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求，而量身定制檢測試劑盒，有效控制檢測試劑成本。并可提供免費代測。

 

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT)水平.用純化的大鼠卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT),再與HRP標記的卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色.TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色.顏色的深淺和樣品中的卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT)呈正相關.用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠卵磷脂膽固醇乙酰轉移酶(LCAT)濃度.

試劑盒組成：

試劑盒組成	48孔配置	96孔配置	保存
說明書	1份	1份
封板膜	2片	2片
密封袋	1個	1個
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存
標準品	0.3ml×6管	0.3ml×6管	2-8℃保存
酶標試劑	5 ml×1瓶	10 ml×1瓶	2-8℃保存
樣品稀釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
終止液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
20×濃縮洗滌液	15ml×1瓶	25ml×1瓶	2-8℃保存

注：標準品濃度依次為：8、4、2、1、0.5、0 ng/mL.

 

 

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

操作步驟

· 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。

· 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

· 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。

· 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

· 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

· 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

· 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘. 

· 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

· 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

注意事項：

· 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡60-120分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

· 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

· 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間hao控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

· 請每次測定的同時做標準曲線，hao做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第yi孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

· 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

· 底物請避光保存。

· 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

· 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

· 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。