馬節(jié)桿菌PCR試劑盒
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生產商,貿易商,
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上海市奉賢區(qū)
上海滬崢專業(yè)生產銷售馬節(jié)桿菌PCR試劑盒現(xiàn)貨,
本試劑盒引物經過優(yōu)化,反應特異性強,即開即用,歡迎新老客戶咨詢訂購。,本試劑盒引物經過優(yōu)化,反應特異性強,即開即用,歡迎新老客戶咨詢訂購。
產品詳細信息
中文名稱:馬節(jié)桿菌PCR試劑盒
英文名稱:Arthrobacter equi
產品規(guī)格:50T/盒
用途】用于馬節(jié)桿菌的檢測、診斷和流行病學調查。
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5次,有效期12個月。
提示:本品僅用于科研實驗,不能用作醫(yī)療及臨床診斷。
馬節(jié)桿菌PCR試劑盒使用方法
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織樣品:每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g,手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;液體樣品,直接取100μL提取
1.2 DNA提取
1) DNA的提取也可以采用(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
2. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
3. PCR擴增(核酸擴增區(qū))
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;
4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL;
熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。
4.3 推薦循環(huán)參數設置:
步驟 | 循環(huán)數 | 溫度 | 時間 | 收集熒光信號 |
1 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
2 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
55℃ | 30sec | 是 |
4. 結果分析判定
5.1 結果分析條件設定
設置Baseline和Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現(xiàn)整體傾斜時,根據分析后圖像調節(jié)Baseline的start值(一般可在3~15范圍內調節(jié))、stop值(一般可在5~20范圍內調節(jié)),以及Threshold的Value值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。
5.2 結果判斷
陽性:檢測通道Ct值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線;
可疑:檢測通道35<Ct值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為35<Ct值≤38,且曲線有明顯的增長曲線,判定為陽性,否則為陰性;
陰性:樣本檢測結果Ct值>38或無Ct值。
5. 質控標準
陰性質控品:Ct>38或無Ct值顯示;
陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且Ct值≤32;
以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。
6. 檢測方法的局限性
? 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;
? 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結果;
? 陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;
? 病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;
? 不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;
? 試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果;
? 本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。
馬節(jié)桿菌PCR試劑盒
◆ 注意事項
1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區(qū)操作。
1
采購數量不能為空
聯(lián)系信息不能為空
驗證碼不正確