轉(zhuǎn)基因大米Bt（cryAb）試劑盒（熒光-PCR法）為上海滬崢主要產(chǎn)品，其特點(diǎn)靈敏性高 、特異性高，判斷陰陽性結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)，廠家供貨，品質(zhì)保證，價格優(yōu)惠,歡迎來電咨詢！

產(chǎn)品名稱：轉(zhuǎn)基因大米Bt（cryAb）試劑盒（熒光-PCR法）

英文名稱：Diagnostic Kit for cryAb Gene DNA (Real-Time PCR Method)

包裝：50T

預(yù)期用途】本試劑盒適用于檢測轉(zhuǎn)基因大米Bt（cryAb）基因，用于篩查待檢測植物中是否含有cryAb 成分。其檢測結(jié)果僅供參考。

【檢驗(yàn)原理】本試劑盒用國家標(biāo)準(zhǔn)的 hLTF 特異性引物和探針，用熒光 PCR 技術(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分的檢測。

【試劑組成】

名 稱	規(guī) 格
酶液	50μL×1 管
cryAb反應(yīng)液	500μL×2 管
cryAb陽性質(zhì)控品	50μL ×1 管
陰性質(zhì)控品	250μL ×1 管

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融，反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次。有效期 12 個月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標(biāo)本采集】稱取 200g 樣品。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰壺。

【使用方法】. 樣品處理（樣本處理區(qū)）樣本前處理

固體樣本：用粉碎機(jī)或冷凍研磨儀將樣品研磨至細(xì)粉狀。

2 DNA 提取

對于固體標(biāo)本，DNA 的提取可以采用 SN/T 2584-2010 中推薦的方法：

1) 每個樣品取 2 個平行管。稱取 200mg 粉碎的樣品，加入 1mL 預(yù)冷至 4℃的抽提液，劇烈搖動混勻后，在冰上靜止 5min，4℃條件下 10000g 離心 15min，棄上清液；

2) 加入 600μL 預(yù)熱至 65℃的裂解液，充分重懸沉淀，在 65℃恒溫保持 40min， 期間顛倒混勻 5 次；

3) 室溫條件下10000g 離心10min，取上清液轉(zhuǎn)移至新離心管中，加入5μLRNAseA， 37℃恒溫 30min，分別用等體積苯酚：異戊醇溶液和*：異戊醇溶液各抽提一次；

4) 室溫條件下，10000g 離心 10min，取上清液至新離心管，加入三分之二體積的異丙醇，十分之一體積的 3mol/L 的乙酸鈉溶液（pH=6.5），-20℃放置 2-3h；

5) 在 4℃條件下，10000g 離心 15min，棄上清液，用 70%乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀；

6) 加入 50μL TE（pH8.0）溶解沉淀，所得溶解即為樣品 DNA 溶液。也可使用等效的 DNA 提取試劑盒。

油脂樣本請直接選用市售油脂 DNA 提取試劑盒，按說明操作。

試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

試劑	cryAb 反應(yīng)液	酶液
用量	20μL	1μL

加樣（樣本處理區(qū)）將步驟 1 提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

實(shí)時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。

轉(zhuǎn)基因