西部馬腦炎病毒(WEE)檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)
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用途范圍 僅限科研
純度 詳詢客服%
產(chǎn)地 國內(nèi)
品牌 上海滬崢
規(guī)格 48T/盒
貨號(hào) HZW0729
商品介紹

本試劑盒用一對(duì)西部馬腦炎病毒(WEE)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR熒光探針法)


特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光
PCR技術(shù)對(duì)
西部馬腦炎病毒(WEE)進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。 

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃避光保存、運(yùn)輸、避免反復(fù)凍融,有效期12個(gè)月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測(cè)儀。
【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用0℃冰壺。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
液體標(biāo)本:取適量標(biāo)本13000rpm離心2min,棄上清。
1.2 DNA提取

1) 對(duì)上述處理好的標(biāo)本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉(zhuǎn)移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)代檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1

管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照),體系配制如下表:

試劑

WSSV 反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為N)

20μl

1μl

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μl,加入相應(yīng)的

反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);

5. 結(jié)果分析判定

結(jié)果分析條件設(shè)定
設(shè)置基線(baseline):一般情況下,對(duì)ABI 7500、7700等儀器設(shè)為6-15cycle,對(duì)PE5700設(shè)為3-15cycle,對(duì)MJ Research Option2設(shè)為6-12cycle。特殊情況可對(duì)基線適當(dāng)調(diào)整。
設(shè)置閾值(threshold):以閾值線剛超過陰性對(duì)照擴(kuò)增曲線(無規(guī)則的噪音線)的zui高點(diǎn)。
結(jié)果判斷
陽性:檢測(cè)樣本Ct值小于等于35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期;
可疑:檢測(cè)樣本Ct值大于35.0且小于40.0,重復(fù)一次實(shí)驗(yàn),如果Ct值仍小于40.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長期,為陽性,否則為陰性;
陰性:檢測(cè)不到樣本Ct值或Ct值為40。
6. 對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解析

實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染,試劑污染,標(biāo)本交叉污染會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果;試劑運(yùn)輸,保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測(cè)效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測(cè)不準(zhǔn)確的結(jié)果。

7. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線無對(duì)數(shù)生長期或無Ct值顯示;
陽性質(zhì)控品:擴(kuò)增曲線有明顯對(duì)數(shù)生長期,且Ct值≤32;
以上條件應(yīng)同時(shí)滿足,否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

【注意事項(xiàng)】

所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;
試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。.



 





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聯(lián)系賣家 李小姐 (QQ:869248833)
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