利用還原劑及反相液相色譜檢測奶粉中的含硫氨基酸

      三鹿“三聚氰胺”毒奶粉事件已經(jīng)過去多年，當(dāng)年的給我國乳業(yè)帶來的空前沉重的打擊，催生了奶粉檢測技術(shù)的革新。但蛋白質(zhì)各具特異性不同蛋白質(zhì)中氨基酸組分不同，如何準(zhǔn)確測定含奶粉中的硫氨基酸，微源檢測實驗室查閱文獻(xiàn)資料，實驗了一種使用二硫蘇糖醇做作為還原劑后進(jìn)反相液相色譜的檢測方式。

      二硫蘇糖醇（DTT）外觀白色固體，化學(xué)式為C4H10O2S2。是種小分子有機(jī)還原劑，還原性較強(qiáng)，主要應(yīng)用于生物技術(shù)領(lǐng)域。

      樣品前處理；準(zhǔn)確稱量樣品，加人3.0mL6mol／L鹽酸溶液，低溫冷凍后氮?dú)獯蹈?，氮?dú)鉅顟B(tài)下封口，120℃水解24小時。水解結(jié)束后取出，冷卻至室溫開封后用pH=9.0硼砂-硼酸緩沖液定容10mL，搖晃均勻后靜置離心操作，取上清2.0mL加入適量二硫蘇糖醇（DTT）等待反應(yīng)結(jié)束，40℃氮?dú)獯蹈?，用pH=9.0硼砂-硼酸緩沖液溶解，搖晃均勻。

      吸取上述1.0mL樣品溶液于具塞試管中衍生操作，振蕩后并加入5.0mLpH=9.0硼砂-硼酸緩沖液及2.0mL氯-3，5-二硝基三氟甲苯(CNBF）溶液，封口65℃水浴0.5小時。衍生結(jié)束后取出置于室溫，振蕩后加入15mLpH=7.0磷酸緩沖液，振蕩30s，靜置10min后取少量液體過0.22um微孔濾膜。

      精確稱取奶粉樣品0.05g5份，分別加入40mmol／L蛋氨酸、胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液25μL、50μL、75μL，三次平行，操作同上。

     實驗數(shù)據(jù)基線平穩(wěn)無雜峰含硫氨基酸峰高明顯增大，操作簡單，耗時少，適用于奶粉中含硫氨基酸的定量檢測。隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，液相色譜法可以作為檢測乳品蛋白質(zhì)摻假的標(biāo)準(zhǔn)流程方法。

公司介紹：

       微源檢測，是集研發(fā)分析測試服務(wù)、藥物質(zhì)量研究、基因毒雜質(zhì)研究、元素雜質(zhì)研究、結(jié)構(gòu)確認(rèn)、生物藥分析服務(wù)等一體，面向全球的獨(dú)立第三方生物醫(yī)藥研發(fā)測試服務(wù)公司。

由國內(nèi)領(lǐng)先的科學(xué)服務(wù)企業(yè)上海泰坦科技股份有限公司（簡稱：泰坦科技）參股成立，秉承“讓檢測精準(zhǔn)又高 效”的價值觀：

l資質(zhì)實驗室 CMA,CNAS，按照ISO-17025和GMP要求建立的實驗室

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l現(xiàn)已成功完成2189個項目

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