土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒

土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒

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品牌 谷研
保質(zhì)期 詳見說明書
含量 詳見說明書
是否危險(xiǎn)化學(xué)品
規(guī)格 50管/48樣
貨號(hào) GOY-01S6504
檢測(cè)方法 可見分光光度法
分類 氮代謝系列
用途 僅供科研使用
包裝
商品介紹

基本信息:
產(chǎn)品名稱:土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50/48
貨號(hào):GOY-01S6504
分類:氮代謝系列
測(cè)定意義:
土壤中的銨態(tài)氮可被土壤膠體吸附,呈交換性銨狀態(tài)氮肥,也可溶解在土壤溶液中,能直接被植物吸收利用,屬于速效性氮素。

測(cè)定原理

土壤中的銨態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚藍(lán),在625nm處有特征吸收峰,吸光值與銨態(tài)氮含量成正比。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿,振蕩儀。
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。
測(cè)定步驟:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.
試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3.
空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A空白管。
4.
標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5.
對(duì)照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
6.
測(cè)定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測(cè)定吸光度,記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管,測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠白介素28A(IL28A)ELISA試劑盒 ,英文名: IL28A ELISA Kit

人游離β(f-βhCG)ELISA檢測(cè)試劑盒humanfreechorionicgonadoopin,f-βhCGELISAKIT 96T/48T

大鼠抗弓形蟲IgM抗體免疫試劑盒 Rat ai-toxoplasmosis IgM Aibody ELISA kit

英文名稱RatC3aELISAKit大鼠補(bǔ)體片斷C3a(C3a)規(guī)格:96T/48T

酒類琥珀酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20

ELISAKitHPV-IgG人狀瘤病毒抗體IgG規(guī)格:48T/96T
豬胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human cyclic adenosine monophosphate (cAMP) ELISA Kit 人環(huán)0酸腺苷(cAMP)ELISA試劑盒

RabbitEndothelialniicoxidesyhase,eNOSELISAKit 兔內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAP12ELISAKit大鼠apelin12規(guī)格:48T/96T

血清樣品液相法去內(nèi)毒素試劑盒20

PorcineIerleukin13,IL-13ELISAKit豬白介素13(IL-13)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-Phospho-Glycogen synthase 1(Ser641)/FITC
熒光素標(biāo)記0酸化葡萄糖合成酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Anti-VIP receptor II/FITC 熒光素標(biāo)記腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh BCNG1/HCN1 腦環(huán)核苷酸門控通道蛋白1抗體 規(guī)格 0.1ml

ACE2(Angiotensin converting enzyme 2) 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2抗原 0.5mg

Glypican 1 英文名稱: 0脂酰基醇蛋白聚糖1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh RAD21 核基質(zhì)蛋白21抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-VIP receptor II/FITC 熒光素標(biāo)記腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體-II/血管活性腸肽受體-II抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
土壤銨態(tài)氮可見分光光度法檢測(cè)試劑盒Anti-Gentamicin Monoclonal Antibody /Gold 膠體金離子標(biāo)記小鼠抗慶大霉素單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.5ml(35nm-40nm)

Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

銜接蛋白β抗體 Anti-beta Adaptin/AP2 0.1ml

ZADH1 英文名稱: 鋅結(jié)合乙醇脫氫酶結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 0.2ml

DYRK1A 英文名稱: 絲酸/蘇酸蛋白激酶MNB抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ER-beta(ser87) 0酸化雌激素受體β抗體 規(guī)格 0.1ml

Defensin Beta2/beta-defensin 2/BD-2(rat) 防御素β2抗原(大鼠)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a.
細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
b.
組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
d.
使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e.
根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2.
試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8
酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b.
反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (
可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3.
樣品測(cè)定:
a.
參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分,注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意:加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37
℃孵育30分鐘。
說明:孵育2535分鐘檢測(cè)出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm
測(cè)定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4.
樣品中總SOD活力的計(jì)算:
a.
抑制百分率的計(jì)算:
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對(duì)照1A空白對(duì)照2)(A樣品-A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對(duì)照3,則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為:
抑制百分率=(A空白對(duì)照1A樣品) / (A空白對(duì)照1A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來的抑制百分率偏高,則需適當(dāng)稀釋樣品;如果測(cè)定出來的抑制百分率偏低,則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD
酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí),反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。


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