測定意義：
PFK（EC 2.7.1.11）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，負責將果糖-6-磷酸和ATP轉化為果糖-1,6二磷酸和ADP，是糖酵解過程的關鍵調節(jié)酶之一。

測定原理

PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
基本信息：
產(chǎn)品名稱：磷酸果糖激酶（PFK）/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號：GOY-01S6605
分類：糖酵解系列

試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。

操作步驟：
1. 樣品的準備：產(chǎn)品僅用于科研
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應啟動工作液后反應即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時，反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。

小鼠S100鈣結合蛋白A8(S100A8)ELISA試劑盒 ，英文名： S100A8 ELISA Kit

人脂蛋白α(Lp-α)ELISA檢測試劑盒Humanlipoproteinα,Lp-αELISAKit 96T/48T

大鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)免疫試劑盒 Rat nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA Kit

英文名稱Rat17-ANPELISAKit大鼠17-羥-孕同(17-ANP)規(guī)格：96T/48T

裂解液VII-2葡萄球菌裂解液

ELISAKitBGP/Gehrelin人腦腸肽規(guī)格：48T/96T
小鼠抑制素A(INH-A)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human granulysin (granulysin) ELISA Kit 人顆粒溶素(granulysin)ELISA試劑盒

HumanGasinELISAKit 人胃泌素(Gasin)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor6-K-PGELISAKit大鼠6同前列腺素規(guī)格：48T/96T

飲料D-蘋果酸比色法定量檢測試劑盒20次

MousemammarycarcinomaMarker-CA153ELISAKit小鼠癌標志物-CA153ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
TAb(Human Thyroid Antibody) ELISA Kit 人甲狀腺抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-ING1/p33 生長抑制因子基因1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型低密度脂蛋白受體抗體 規(guī)格 0.2ml

aFABP(Human adipocyte fatty acid-binding protein) ELISA Kit 人脂肪細胞型脂肪酸結合蛋白 96T

Relaxin 1 英文名稱： 松弛肽/松弛素抗體 0.2ml

C12ORF68 英文名稱： 12號染色體開放閱讀框68抗體 0.2ml

Anti-ING1/p33 生長抑制因子基因1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
磷酸果糖激酶（PFK）/6磷酸果糖激酶/果糖6磷酸激酶微量法檢測試劑盒Anti-TGF- BetaR 2/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

NKB (Neurokinins B) 神經(jīng)激肽B(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

抗相關抗原5抗體 Anti-SPAG5/map126 0.1ml

SERPINB12 英文名稱： 絲酸蛋白酶抑制劑B12抗體 0.2ml

EHM2 英文名稱： EHM2蛋白抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-MAP4K4(Ser801) 0酸化原活化蛋白激酶MAP4K4抗體 規(guī)格 0.1ml

NKB (Neurokinins B) 神經(jīng)激肽B(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg