基本信息：
產(chǎn)品名稱(chēng)：ATP檸檬酸裂解酶（ACL）微量法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法: 微量法
規(guī)格 : 100管/96樣
貨號(hào)：GOY-01S6663
分類(lèi)：脂肪酸代謝系列
測(cè)定意義：
ACL（EC4.1.3.8）是脂肪酸合成中的關(guān)鍵酶，其催化產(chǎn)生的乙酰輔酶A可用于脂肪酸合成和碳鏈延長(zhǎng)、黃酮類(lèi)物質(zhì)合成、氨基酸合成等。

測(cè)定原理：

ACL在ATP和輔酶A存在的情況下催化檸檬酸裂解為乙酰輔酶A、草酰乙酸、腺苷二磷酸和磷酸鹽。蘋(píng)果酸脫氫酶進(jìn)一步催化草酰乙酸和NADH生成蘋(píng)果酸和NAD+，在340nm測(cè)定NADH減少速率，計(jì)算ACL活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠L選擇素(SELL)ELISA試劑盒 ，英文名： SELL ELISA Kit

鮭魚(yú)降鈣素(SCT)ELISA檢測(cè)試劑盒Salmoncalcitonin,SCTELISAKit 96T/48T

人 Liprin alpha 1 免疫試劑盒 Human Liprin alpha 1 ELISA Kit

英文名稱(chēng)MouseCCL20ELISAKit小鼠CCL20規(guī)格：96T/48T

冰凍切片組織衰老特異性脂褐素靛酚原位染色試劑盒50次

RatEpithelialneuophilactivatingpeptide78,ENA-78ELISA試劑盒大鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(vWF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Dipeptidyl peptidase IV in two rats (DPP IV) ELISA Kit 大鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒

HumanImmuneRNA,IrnaELISAKit 人免疫核糖核酸(Irna)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

抗抗體IgM(間接法二步法)

硬組織固著液(Susa固著液)50毫升

MouseIerleukin1,IL-1ELISAKit小鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
ANG- II (Human angiotension II ) ELISA Kit 人血管緊張素ⅡMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

Anti-PAI-2 纖溶酶原激活物抑制因子2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh HPRT 次0酸核糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體 規(guī)格 0.2ml

ALA/LCA(Human anti-lymphocytotoxic antibody) ELISA Kit 人抗淋巴細(xì)胞毒抗體 96T

Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 英文名稱(chēng)： 0酸化0酯酶Cγ2抗體 0.1ml

CACNA2 英文名稱(chēng)： 鈣通道L型α2多肽抗體 0.2ml

Anti-PAI-2 纖溶酶原激活物抑制因子2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
ATP檸檬酸裂解酶（ACL）微量法檢測(cè)試劑盒Anti-p-VEGFR2/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠0酸化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依賴(lài)激酶抑制因子1C抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

細(xì)胞間粘附分子-3抗體 Anti-CD50/ICAM-3 0.1ml

Synphilin-1 英文名稱(chēng)： 核突觸蛋白相互作用蛋白1抗體 0.1ml

Endo G 英文名稱(chēng)： 核酸內(nèi)切酶G抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-GIT1(Tyr510) 0酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1 規(guī)格 0.1ml

Cdkn1c/p57/Kip2 (Cyclindependent kinase inhibitor 1C) 周期蛋白依賴(lài)激酶抑制因子1C抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類(lèi)常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)礊榉磻?yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開(kāi)始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說(shuō)明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來(lái)的SOD活力無(wú)顯著差異，但為保證檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 抑制百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒(méi)有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：
抑制百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來(lái)的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來(lái)的抑制百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。