測定意義：
ACC在生物體內(nèi)催化乙酰輔酶A羧化生成丙二酰輔酶A，是脂肪酸和許多次生代謝產(chǎn)物合成的關(guān)鍵酶。ACC的活性在一定程度上決定了脂肪酸的合成速度和含油量的高低。

測定原理

ACC能夠催化乙酰輔酶A、NaHCO3和ATP生成丙二酰輔酶A、ATP和無機磷，通過鉬酸銨定磷法測定無機磷的增加量來測定ACC活性。

需自備的儀器和用品

分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
基本信息：
產(chǎn)品名稱：乙酰輔酶A羧化酶（ACC）可見分光光度法檢測試劑盒
測試方法: 可見分光光度法
規(guī)格 : 50管/24樣
貨號：GOY-01S6654
分類：脂肪酸代謝系列

試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。
標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。
測定步驟：
1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。
4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。
5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。
注意：空白管和標準管只需測定一次。

操作步驟：
1. 樣品的準備：產(chǎn)品僅用于科研
a. 細胞樣品的準備：收集細胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定，可以冰浴保存；如果當天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備：需自備SOD標準品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品，但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3. 樣品測定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動工作液后反應(yīng)即會開始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動工作液的時間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說明：孵育25至35分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異，但為保證檢測結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測定吸光度。如無450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4. 樣品中總SOD活力的計算：
a. 抑制百分率的計算：
參考如下計算公式計算抑制百分率：
抑制百分率＝[(A空白對照1－A空白對照2)－(A樣品－A空白對照3)] / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果沒有設(shè)置空白對照3，則可以把計算公式簡化為：
抑制百分率＝(A空白對照1－A樣品) / (A空白對照1－A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高，則需適當稀釋樣品；如果測定出來的抑制百分率偏低，則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中抑制百分率為50% 時，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。

小鼠NANOG同源域蛋白(NANOG)ELISA試劑盒 ，英文名： NANOG ELISA Kit

大鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA檢測試劑盒Ratleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit 96T/48T

人EJ抗體/抗甘氨酰NA合成酶抗體(EJ/GlyRS)免疫試劑盒 Human ai-EJ-aibody,EJ/GlyRS ELISA Kit

英文名稱MouponinIELISAKit小鼠肌鈣蛋白-I(Tn-I)規(guī)格：96T/48T

冰凍切片核酸氧化8-氧鳥苷(8-oxo-G)熒光染色測定試劑盒10次

RatAndrostenedione,ASDELISA試劑盒大鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠血栓素B2(TXB2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat dopamine (DA) ELISA Kit 大鼠(DA)ELISA試劑盒

Humanα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit 人α羥基脫輕酶(αHBDH)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor(LDH)ELISAKit大鼠乳酸脫氫酶規(guī)格：48T/96T

熒光標記法細胞端粒酶活性AP電泳分析試劑盒10次

MouseIerleukin23,IL-23ELISAKit小鼠白介素23(IL-23)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-HDAC4/FITC 熒光素標記組蛋白去乙?；?/span>4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光素標記0酸化30酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh BAFFR/CD268 B細胞活化因子受體抗體 規(guī)格 0.2ml

AIF (Apoptosis-Inducing Factor) 調(diào)亡誘導(dǎo)因子(多肽片斷抗原) 0.5mg

LRP130 英文名稱： 富含亮酸蛋白LRP130抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-pig IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標記的兔抗豬IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-Phospho-PDK1 (Ser241) /FITC 熒光素標記0酸化30酸肌醇依賴性蛋白激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
乙酰輔酶A羧化酶（ACC）可見分光光度法檢測試劑盒Anti-TNF- Alpha /HRP 辣根過氧化物酶標記鼠抗人壞死因子-α單克隆抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

PLGF (Placenta growth factor) 胎盤生長因子(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

腱糖蛋白-C抗體 anti-Tn-C 0.2ml

5HT1E Receptor 英文名稱： 5-羥色胺受體1E抗體 0.2ml

EMR1 英文名稱： 表皮生長因子樣激素受體1 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 0酸化活化蛋白激酶B抗體 規(guī)格 0.2ml

PLGF (Placenta growth factor) 胎盤生長因子(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg