PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fKetoprofen  中文名：酮基布洛芬  分子式：C16H14O3    豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ketoconazole  中文名：酮康唑  分子式：C26H28Cl2N4O4    豬氧化酶(DAO)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Jacaranone  中文名：  分子式：C9H10O4    豬端粒酶(TE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ivermectin B1a  中文名：依維菌素  分子式：C48H74O14    豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Ivabradine hydrochloride  中文名：鹽酸伊伐布雷定  分子式：C27H37ClN2O5    豬肝細(xì)胞生長因子elisa試劑盒   豬肝細(xì)胞生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬肝細(xì)胞生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬肝細(xì)胞生長因子試劑盒、豬肝細(xì)胞生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒(-PCR法)   48T  Shiraiachrome A  124709-39-3  中文名：  分子式：C30H26O10  度：%  關(guān)鍵詞：  抗生成; 對照品; 標(biāo)準(zhǔn)品; 微生物代謝產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

豬超氧化物歧化酶(SOD)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Taxilluside A  中文名：  分子式：C18H24O10  度：97.5%

豬腸三葉因子elisa試劑盒   豬腸三葉因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬腸三葉因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬腸三葉因子試劑盒、豬腸三葉因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Tazobactam acid  中文名：他唑巴坦酸  分子式：C10H12N4O5S  度：98.0%

豬腸三葉因子(ITF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Tebipenem pivoxil  中文名：泰比培南酯  分子式：C22H31N3O6S2  度：98.0%

豬腸三葉因子(ITF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Sunitinib malate  341031-54-7  中文名：蘋果酸舒尼替尼  分子式：C26H33FN4O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

Deoxylapachol  中文名：  分子式：C15H14O2  度：97.0%  兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

9-Hydroxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H14O4  度：96.0%  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dehydro-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H12O3  度：97.5%  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

α-Lapachone  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  兔壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

9-Methoxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C16H16O4  度：%  兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

伊麗莎白巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒說明書兔白介素17(IL-17)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Benzoyloxy-2-azetidinone  28562-58-5  中文名：4-苯甲酰氧基-2-氮雜環(huán)丁酮  分子式：C10H9NO3  度：98.0%   

兔白介素-12(rabbit IL-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  中文名：N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式：C19H19NO6 

兔白介素-10(rabbit IL-10)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  中文名：N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式：C19H19NO6  度：98.0%

兔白介素1（IL-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式：C16H21NO6  度：98.0%

兔阿霉素(ADR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式：C16H21NO6

注意事項(xiàng)：

伊麗莎白巴爾通體探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。