PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fNandrolone  434-22-0  中文名：諾龍  分子式：C18H26O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠仙臺病毒（Sendai）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Naftopidil dihydrochloride  57149-08-3  中文名：鹽酸萘哌地爾  分子式：C24H30Cl2N2O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)小病毒（CPV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Naftifine hydrochloride  65473-14-5  中文名：鹽酸萘替芬  分子式：C21H22ClN  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-Acetyl-L-tyrosine  537-55-3  中文名：乙酰酪氨酸  分子式：C11H13NO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

N-Acetyl-L-tryptophan  1218-34-4  中文名：N-乙酰-L-色氨酸  分子式：C13H14N2O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子/CD147   英文名稱：   mouse Exacellular Maix Metalloproteinase Inducer /CD147   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   EMMPRIN/CD147

小鼠前列腺特異性抗原elisa試劑盒   小鼠前列腺特異性抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠前列腺特異性抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠前列腺特異性抗原試劑盒、小鼠前列腺特異性抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Ginsenoyne K  中文名：  分子式：C17H24O3  度：%

小鼠前列腺特異性抗原(PSA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Gliclazide  21187-98-4  中文名：格列齊特  分子式：C15H21N3O3S 

小鼠前列腺酸性0酸酶elisa試劑盒   小鼠前列腺酸性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠前列腺酸性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠前列腺酸性0酸酶試劑盒、小鼠前列腺酸性0酸酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Bisdemethoxycucurmin  24939-16-0  中文名：雙去甲氧基姜黃素  分子式：C19H16O4 

小鼠前列腺酸性0酸酶(PAP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              L-Aspartic acid  56-84-8  中文名：L-天門冬氨酸  分子式：C4H7NO4 

小鼠前列腺素F(PGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Gimeracil  中文名：吉莫斯特  分子式：C5H4ClNO2  度：98.0%Arillatose B  137941-45-8  中文名：  分子式：C22H30O14    Humanpituitaryadenylatecyclaseactivatingpolypeptide,PACAPELISAKit人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Catalponol methylthiomethyl ether  1432057-74-3  中文名：  分子式：C17H22O2S    兔子視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Ethyl glucoside  3198-49-0  中文名：乙基葡萄糖苷  分子式：C8H16O6    Rat serum amyloid A (SAA) ELISA Kit 大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒

3-Hydroxycatalponol  265644-24-4  中文名：  分子式：C15H18O3    HumanPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 人過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

3,4-Dihydro-3,4-dihydroxynaphthalen-1(2H)-one  1220891-22-4  中文名：  分子式：C10H10O3    Humandermato-poin,DPTELISA試劑盒人皮膚蛋白(DPT)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

蝦肝腸微胞蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Tetracaine  中文名：丁卡因  分子式：C15H24N2O2  度：98.0%  生存素 (survivin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Tetracaine hydrochloride  中文名：鹽酸丁卡因  分子式：C15H25ClN2O2  度：98.0%  無形體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Prilocaine hydrochloride  中文名：鹽酸丙胺卡因  分子式：C13H21ClN2O  度：98.0%  東方體核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Dibucaine hydrochloride  中文名：鹽酸地布卡因  分子式：C20H30ClN3O2  度：98.0%  人皰疹病毒6型(HHV-6)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Ropivacaine hydrochloride  中文名：鹽酸羅哌卡因  分子式：C17H27ClN2O  度：98.0%  (OC43/HKU1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

注意事項(xiàng)：

蝦肝腸微胞蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。