PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fN,N'-Di-Boc-1H-pyrazole-1-carboxamidine  中文名：N,N'-二叔丁氧羰基-1H-吡唑-1-甲脒  分子式：C14H22N4O4  度：98.0%  小鼠可溶性白介素-2受體   英文名稱：    soluble ierleukin-2 recepor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sIL-2R

Benzimidazole  中文名：苯并咪唑  分子式：C7H6N2  度：98.0%  小鼠白介素-3   英文名稱：    ierleukin-3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IL-3

Benzoin oxime  中文名：安息香肟  分子式：C14H13NO2  度：98.0%  小鼠白介素-4   英文名稱：    ierleukin-4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IL-4

Benzopinacol  中文名：苯頻哪醇  分子式：C26H22O2  度：98.0%  小鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

5-Benzimidazolecarboxylic acid  中文名：5-苯并咪唑甲酸  分子式：C8H6N2O2  度：98.0%  小鼠降鈣素原(PCT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

線粒體檸檬酸(MCA）含量測(cè)試盒   紫外分光光度法   25管/24樣  Averantin  5803-62-3  中文名：  分子式：C20H20O7 

線粒體解偶聯(lián)蛋白2   英文名稱：   Mouse Mitochondrial Uncoupling Protein 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   UCP2  Fluoronaphthalene  321-38-0  中文名：  分子式：C10H7F  度：98.0%   

線粒體呼吸鏈復(fù)合物II試劑盒（琥珀酸-輔酶Q還原酶）  Avanafil  330784-47-9  中文名：阿伐那非  分子式：C23H26ClN7O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性測(cè)試盒   可見分光光度法   25管/24樣  Atrazine  中文名：阿特拉津  分子式：C8H14ClN5  度：98.0%

線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅳ活性測(cè)試盒   可見分光光度法   25管/24樣              4,4'-Dimethoxytrityl chloride  中文名：4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷  分子式：C21H19ClO2生成素 -2(Angiopoietin-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3  度：98.0%

內(nèi)皮抑素 (Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxandrolone  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3  度：98.0%

內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子 -1(VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Androstanolone acetate  1164-91-6  中文名：雄諾龍醋酸酯  分子式：C21H32O3 

內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-R3  Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18 

內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-R2  Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18  度：98.0%

蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲腐臭病）探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Minisecolide C  中文名：  分子式：C28H34O7    豬白介素17(IL-17)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Miconazole nitrate  中文名：硝酸咪康唑  分子式：C18H15Cl4N3O4    豬白介素12（IL-12）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Metronidazole  中文名：甲硝唑  分子式：C6H9N3O3    豬白介素10(IL-10)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Metoclopramide  中文名：甲氧氯普胺  分子式：C14H22ClN3O2    豬白介素1(IL-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Methyltestosterone  中文名：甲基睪酮  分子式：C20H30O2    豬白介素1β(IL-1β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

蜂房蜜蜂球菌（歐洲蜂幼蟲腐臭?。┨结樂晒舛?/span>PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。