PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f2-Acetyl-6-methoxynaphthalene  中文名：6-甲氧基-2-乙酰萘  分子式：C13H12O2  度：99.0%  小鼠α羥基脫氫酶elisa試劑盒   小鼠α羥基脫氫酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠α羥基脫氫酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α羥基脫氫酶試劑盒、小鼠α羥基脫氫酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Abscisic acid  中文名：脫落酸  分子式：C15H20O4  度：99.0%  小鼠α葡萄糖苷酶elisa試劑盒   小鼠α葡萄糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠α葡萄糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α葡萄糖苷酶試劑盒、小鼠α葡萄糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

(S)-4-(4-Aminobenzyl)-2(1H)-oxazolidinone  中文名：(s)-4-(4-氨基芐基)-1,3-噁唑烷-2-酮  分子式：C10H12N2O2  度：98.0%  小鼠α干擾素elisa試劑盒   小鼠α干擾素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠α干擾素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠α干擾素試劑盒、小鼠α干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

2-Amino-3-Formylchromone  中文名：2-氨基-3-甲?；?/span>  分子式：C10H7NO3  度：98.0%  小鼠β-防御素(β-DF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Acid Black 1  中文名：酸性黑 1  分子式：C22H14N6Na2O9S2  度：99.0%  小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

唾液酸（SA）檢測   Apoptosis (TdT mediated by in situ end of the double labelling method) detection  Axitinib  319460-85-0  中文名：阿西替尼  分子式：C22H18N4OS 

唾液酸（SA）測試盒（帶SA標準）   Saliva acid (SA) test case (with SA standard)  Ampicillin Trihydrate  7177-48-2  中文名：氨芐西林三水酸  分子式：C16H19N3O4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

唾液酸（SA）測定試劑盒（帶SA標準）（比色法）                    Physaminimin C  1582259-03-7  中文名：  分子式：C28H38O8 

脫脂奶粉   100g  Amoxicillin trihydrate  61336-70-7  中文名：羥氨芐青霉素三水合物  分子式：C16H19N3O5S  度：98.0%   

脫氧核糖核酸酶I   100mg  Amoxicillin  26787-78-0  中文名：阿莫西林  分子式：C16H19N3O5S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：小鼠轉(zhuǎn)酶elisa試劑盒   小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠轉(zhuǎn)酶試劑盒、小鼠轉(zhuǎn)酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Chrysophanol  481-74-3  中文名：大黃酚  分子式：C15H10O4  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  抗菌; 導瀉; 酸模屬; 大黃屬; 決明屬; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠轉(zhuǎn)酶/谷轉(zhuǎn)酶(ALT/GPT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Ethyl β-D-fructofuranoside  1820-84-4  中文名：乙基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C8H16O6 

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Methyl (3R)-3-(tert-butyldimethylsilyloxy)-5-oxo-6-triphenylphosphoranylidenehexanoate  中文名：  分子式：C31H39O4PSi 

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β2(mouse TGF-β2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  N-Demethylricinine  中文名：  分子式：C7H6N2O2  度：98.0%

小鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β2   英文名稱：   Ttansforming Growth Factor -β2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TGF-β2  n-Butyl β-D-fructofuranoside  中文名：正丁基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C10H20O6

毛霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Methasterone  3381-88-2  中文名：甲基屈他雄酮  分子式：C21H34O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脫氧酚/脫氧啉(DPD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Metamizole sodium  68-89-3  中文名：安乃近  分子式：C13H16N3NaO4S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脫氫表雄酯(DHEA-S)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Mesterolone  1424-00-6  中文名：甲氫睪酮  分子式：C20H32O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脫氫表雄S7(DHEA-S7)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Mestanolone  521-11-9  中文名：美雄諾龍  分子式：C20H32O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠脫氧酚elisa試劑盒   小鼠脫氧酚試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠脫氧酚試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠脫氧酚試劑盒、小鼠脫氧酚eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Mequindox  13297-17-1  中文名：乙酰甲喹  分子式：C11H10N2O3  度：98.0%      小鼠粘蛋白elisa試劑盒   小鼠粘蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠粘蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠粘蛋白試劑盒、小鼠粘蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項：

毛霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。