PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f小鼠白三烯elisa試劑盒   小鼠白三烯試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠白三烯試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠白三烯試劑盒、小鼠白三烯eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Cerevisterol  516-37-0  中文名：啤酒甾醇  分子式：C28H46O3  度：96.5%  關(guān)鍵詞：  靈芝; 麥角甾烷; 對(duì)照品; 標(biāo)準(zhǔn)品; 微生物代謝產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

小鼠白三烯E4（LTE4）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Cerevisterol  中文名：啤酒甾醇  分子式：C28H46O3 

小鼠白三烯C4(LTC4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-[Bis(methylthio)methylene]- p-toluenesulfonamide  2651-15-2  中文名：N-[雙(甲硫基)亞甲基]對(duì)甲苯磺酰胺  分子式：C10H13NO2S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠白三烯C4   英文名稱：   Mouse Leukoiene C4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   LTC4  Gynuramide II  中文名：  分子式：C42H83NO5 

小鼠白三烯B4(mouse LTB4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Benzyl 4-hydroxybenzoate  中文名：4-羥基苯甲酸芐酯  分子式：C14H12O3  度：98.0%

2-(Phenylmethoxy)-naphthalene  613-62-7  中文名：2-萘酚芐基醚  分子式：C17H14O  度：98.0%      小鼠核因子κB受體活化因子配基elisa試劑盒   小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠核因子κB受體活化因子配基試劑盒、小鼠核因子κB受體活化因子配基eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

2-(Morpholinodithio)benzothiazole  95-32-9  中文名：2-(4-嗎啉基二硫代)苯并噻唑  分子式：C11H12N2OS3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體elisa試劑盒   小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體試劑盒、小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  109113-72-6  中文名：  分子式：C10H9ClN2  度：98.0%      小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體elisa試劑盒   小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體試劑盒、小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

2-(7-Methoxy-1-naphthyl)ethylamine hydrochloride  139525-77-2  中文名：  分子式：C13H16ClNO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠甲種胎兒球蛋白elisa試劑盒   小鼠甲種胎兒球蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠甲種胎兒球蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠甲種胎兒球蛋白試劑盒、小鼠甲種胎兒球蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

2-(5-Chloro-2-phenoxyphenyl)acetic acid  70958-20-2  中文名：  分子式：C14H11ClO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠核因子kb（NF-kb）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝鴨子胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Phomaligol A  中文名：  分子式：C14H20O6  度：%

鴨子白介素12（IL-12）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Phomaligol A  中文名：  分子式：C14H20O6 

鴨子β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Phomaligol A  152204-32-5  中文名：  分子式：C14H20O6  度：%  關(guān)鍵詞：  對(duì)照品; 標(biāo)準(zhǔn)品; 微生物代謝產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

鴨主要組織相容性復(fù)合體elisa試劑盒   鴨主要組織相容性復(fù)合體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   鴨主要組織相容性復(fù)合體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：鴨主要組織相容性復(fù)合體試劑盒、鴨主要組織相容性復(fù)合體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Piracetam  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2 

鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Phomaligol A  152204-32-5  中文名：  分子式：C14H20O6

線頸細(xì)頸線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片N1-Methyl-4-nitrobenzene-1,2-diamine  41939-61-1  中文名：  分子式：C7H9N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠CXC趨化因子配體16(mouse CXCL16)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

N-[Bis(methylthio)methylene]- p-toluenesulfonamide  2651-15-2  中文名：N-[雙(甲硫基)亞甲基]對(duì)甲苯磺酰胺  分子式：C10H13NO2S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠細(xì)胞色素elisa試劑盒   小鼠細(xì)胞色素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠細(xì)胞色素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠細(xì)胞色素試劑盒、小鼠細(xì)胞色素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N-[3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-6-iodoquinazolin-4-amine  231278-20-9  中文名：  分子式：C21H14ClFIN3O  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白elisa試劑盒   小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白試劑盒、小鼠嗜酸性粒細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N-[2-Isopropylthiazol-4-ylmethyl(methyl)carbamoyl]-L-valine  154212-61-0  中文名：  分子式：C14H23N3O3S  度：98.0%      小鼠羥脯酸elisa試劑盒   小鼠羥脯酸試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠羥脯酸試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠羥脯酸試劑盒、小鼠羥脯酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N,N-dimethyl-2-Quinoxalinamine  35552-76-2  中文名：  分子式：C10H11N3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠凝溶膠蛋白elisa試劑盒   小鼠凝溶膠蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠凝溶膠蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠凝溶膠蛋白試劑盒、小鼠凝溶膠蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

線頸細(xì)頸線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。