實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數(shù)規(guī)格：

產品名稱：卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片

英文名稱：Pneumocystis carinii

貨號: GOY-M4372

產品規(guī)格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f細菌總ATP酶(totalATPase)活性比色法定量檢測試劑盒20次  2,2'-Dithiobisbenzanilide  135-57-9  中文名：2,2'-二苯甲酰氨基二苯二硫  分子式：C26H20N2O2S2  度：98.0%   

細菌茁糖酵解溴百里酚藍(BTB)瓊脂平板50個  2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine  中文名：  分子式：C13H16FN3O6  度：98.0%

細菌茁糖酵解酚紅瓊脂平板50個  2,4-Dihydroxypyridine  中文名：  分子式：C5H5NO2  度：98.0%

細菌脂肪酶(LIPASE)活性定性染色試劑盒20次  20-Hydroxyecdysone  5289-74-7  中文名：20-羥基蛻皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%  關鍵詞：  抗炎; 抗心律失常; 抗?jié)?/span>; 蛻皮甾; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

細菌脂肪酶(LIPASE)活性比色法定量檢測試劑盒20次  22-Dehydroclerosterol glucoside  143815-99-0  中文名：  分子式：C35H56O6  度：%  關鍵詞：  抗肝毒; 豆甾烷; 甾苷; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

Benzalazine  中文名：二芐肼  分子式：C14H12N2  度：98.0%  小鼠白介素1(IL-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzofuroxan  中文名：苯并呋咱  分子式：C6H4N2O2  度：98.0%  小鼠白介素1β(IL-1β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

(2-Benzothiazolylthio)acetic acid  中文名：2-(苯并噻唑基硫代)乙酸  分子式：C9H7NO2S2  度：98.0%  小鼠肌紅蛋白(MYO/MB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Anthraquinone-1,5-disulfonic acid disodium salt  中文名：蒽醌-1,5-二磺酸二鈉鹽  分子式：C14H6Na2O8S2  度：98.0%  小鼠血栓素B2(TXB2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

2-(Morpholinodithio)benzothiazole  中文名：2-(4-嗎啉基二硫代)苯并噻唑  分子式：C11H12N2OS3  度：98.0%  小鼠白介素 -5 (mouse IL-5)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 Biosource小鼠生成素elisa試劑盒   小鼠生成素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠生成素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠生成素試劑盒、小鼠生成素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  N-[3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)phenyl]-6-iodoquinazolin-4-amine  231278-20-9  中文名：  分子式：C21H14ClFIN3O  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠生成素4(ANG-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Methyl levulinate  中文名：  分子式： 

小鼠生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Methyl levulinate  624-45-3  中文名：  分子式：  度：%  關鍵詞：  中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

小鼠生成素-2   英文名稱：   Angiopoietin-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANG 2  Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：C22H17N3O4 

小鼠生成素1(ANG-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Methyl levulinate  624-45-3  中文名：  分子式：

卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Isosorbide dinitrate  中文名：硝酸異山梨酯  分子式：C6H8N2O8    植物維生素K1elisa試劑盒   植物維生素K1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   植物維生素K1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：植物維生素K1試劑盒、植物維生素K1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Isoniazid  中文名：異  分子式：C6H7N3O    人preptinelisa試劑盒   人preptin試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人preptin試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：人preptin試劑盒、人preptin elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Isodiospyrin  中文名：  分子式：C22H14O6    雞活性腸肽elisa試劑盒   雞活性腸肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   雞活性腸肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：雞活性腸肽試劑盒、雞活性腸肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

Irinotecan hydrochloride  中文名：鹽酸伊立替康  分子式：C31H35ClN4O6    豬干擾素-γelisa試劑盒   豬干擾素-γ試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬干擾素-γ試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬干擾素-γ試劑盒、豬干擾素-γeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Irbesartan  中文名：厄貝沙坦  分子式：C25H28N6O    大鼠纖溶酶原激活物抑制因子elisa試劑盒   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   大鼠纖溶酶原激活物抑制因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：大鼠纖溶酶原激活物抑制因子試劑盒、大鼠纖溶酶原激活物抑制因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

服務流程：

卡氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）