PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f無內(nèi)質(zhì)粒小量提取試劑盒   50T  Androstenedione  中文名：雄烯二酮  分子式：C19H26O2  度：98.0%

無內(nèi)質(zhì)粒大量提取試劑盒   5T  Androstenone hydrazone  63015-10-1  中文名：雄酮腙  分子式：C19H30N2O  度：98.0%   

無菌甘油   100ml  Androstenedione  1963/5/8  中文名：雄烯二酮  分子式：C19H26O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

胃泌素 (Gasin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Aspirin  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4 

胃泌素   英文名稱：   Gasin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   G  Androstenediol-3-acetate  1639-43-6  中文名：雄甾烯二醇-3-乙酸酯  分子式：C21H32O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

5-Acetyl-3-chloro-10,11-dihydro-5H-dibenz[b,f]azepine  中文名：  分子式：C16H14ClNO  度：98.0%  小鼠γ基(GABA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Adenosine 5'-monophosphate  中文名：5'-腺嘌呤核苷酸  分子式：C10H14N5O7P  度：98.0%  小鼠γ基(GABA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

2-Acetyl-3-ethylpyrazine  中文名：2-乙?；?/span>-3-乙基吡嗪  分子式：C8H10N2O  度：99.0%  小鼠5羥色胺(5-HT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

2-Amino-6-ethoxybenzothiazole  中文名：2-氨基-6-乙氧基苯并噻唑  分子式：C9H10N2OS  度：99.0%  小鼠P物質(zhì)受體(SP-R)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

N-Acetyl-L-tryptophan  中文名：N-乙酰-L-色氨酸  分子式：C13H14N2O3  度：99.0%  小鼠P物質(zhì)(SP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T小鼠緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Ethyl 2-(3-formyl-4-hydroxyphenyl)-4-methylthiazole-5-carboxylate  161798-01-2  中文名：  分子式：C14H13NO4S 

小鼠緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Bisdemethoxycucurmin  中文名：雙去甲氧基姜黃素  分子式：C19H16O4 

小鼠緊張素轉(zhuǎn)化酶   英文名稱：   Angiotensin Conveing Enzyme   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACE  Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate  中文名：  分子式：Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate  度：98.0%

小鼠緊張素原elisa試劑盒   小鼠緊張素原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠緊張素原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠緊張素原試劑盒、小鼠緊張素原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Methyl 2-ethoxybenzimidazole-7-carboxylate  中文名：  分子式：C11H12N2O3 

小鼠緊張素原(aGT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Methyl 2,2-dithienylglycolate  中文名：  分子式：C11H10O3S2  度：98.0%

豬圓環(huán)病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Imatinib mesylate  中文名：伊馬替尼  分子式：C30H35N7O4S  度：98.0%  心肌鈣蛋白 I(cTnI)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Imatinib  中文名：伊馬替尼  分子式：C29H31N7O  度：98.0%  細(xì)胞凋亡抑制因子BCL-2   英文名稱：   Cell appoptosis inhibitory BCL-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BCL-2

Mitiglinide calcium  中文名：米格列奈鈣  分子式：C19H25NO3  度：98.0%  腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子   英文名稱：   Brain-derived Neuroophin factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BDNF

9-Aminominocycline hydrochloride  中文名：  分子式：C23H29ClN4O7  度：98.0%  骨成型蛋白-2   英文名稱：   Bone morphogenetic protein-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BMP-2

Minocycline hydrochloride  中文名：  分子式：C23H28ClN3O7  度：98.0%  骨成型蛋白-4   英文名稱：   Bone morphogenetic protein-4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BMP-4

注意事項(xiàng)：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。