實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數規(guī)格：

產品名稱：豬托克特諾病毒探針法熒光定量PCR試劑盒廠家

英文名稱：Torque Teno Sus Virus(TTSuV)

貨號: GOY-M4566

產品規(guī)格：50T

產品運輸：低溫運輸

產品保存：-20℃保存

產品有效期：一年

產品及特點:

是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。

11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f上腺素   英文名稱：   Adrenalin/   英文縮寫：   ADR   規(guī)格：   48T/96T  3-Hydroxycatalponol  265644-24-4  中文名：  分子式：C15H18O3  度：97.0%  關鍵詞：  四氫萘酮; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫

上皮鈣粘蛋白   英文名稱：   Human E.cadherin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   E.cn  2''-O-Acetylsprengerinin C  中文名：  分子式：C46H72O17  度：%

山羊胰島素樣生長因子1（IGF-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3-Cyclopropylmethoxy-4-difluoromethoxybenzoic acid  162401-62-9  中文名：  分子式：C12H12F2O4 

山羊胰島素   英文名稱：   lnsulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   INS  3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17-one  中文名：3-乙氧基-雄甾-3,5-二烯-17-酮  分子式：C21H30O2 

山羊血小板衍化生長因子（PDGF）ELISA試劑盒         組裝/原裝  3-Chloro-4-(3-fluorobenzyloxy)nitrobenzene  中文名：  分子式：C13H9ClFNO3  度：98.0%

20-Hydroxyecdysone  中文名：20-羥基蛻皮甾酮  分子式：C27H44O7  度：98.0%  兔抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Stigmasterol glucoside  中文名：  分子式：C35H58O6  度：97.0%  兔抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Stigmastane-3,6-diol  中文名：  分子式：C29H52O2  度：%  兔抗糖蛋白抗體elisa試劑盒   兔抗糖蛋白抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔抗糖蛋白抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔抗糖蛋白抗體試劑盒、兔抗糖蛋白抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

17α-Thevebioside  中文名：  分子式：C36H56O13  度：%  兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒   兔抗平滑肌抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔抗平滑肌抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔抗平滑肌抗體試劑盒、兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

α-Spinasterol acetate  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2  度：96.0%  兔抗凝血酶elisa試劑盒   兔抗凝血酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔抗凝血酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：兔抗凝血酶試劑盒、兔抗凝血酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。小鼠骨成型蛋白7   英文名稱：   Mouse Bone Morphogenetic Protein 7   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BMP7  Dehydroepiandrosterone  中文名：脫氫表雄酮  分子式：C19H28O2  度：99.0%

小鼠骨成型蛋白-4(mouse BMP-4)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Fingolimod  162359-55-9  中文名：芬戈莫德  分子式：C19H33NO2 

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dehydroepiandrosterone acetate  中文名：醋酸去氫表雄酮  分子式：C21H30O3 

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Dehydroadynerigenin β-neritrioside  中文名：  分子式：C42H62O17 

小鼠骨成型蛋白-4   英文名稱：   Bone morphogenetic protein-4   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   BMP-4  Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside  中文名：  分子式：C36H52O13

豬托克特諾病毒探針法熒光定量PCR試劑盒廠家D-Mannitol diacetonide  1707-77-3  中文名：  分子式：C12H22O6  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠0脂酰肌醇抗體elisa試劑盒   小鼠0脂酰肌醇抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠0脂酰肌醇抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠0脂酰肌醇抗體試劑盒、小鼠0脂酰肌醇抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

DL-Alanyl-DL-Methionine  1999-43-5  中文名：DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸  分子式：C8H16N2O3S  度：99.0%  關鍵詞：    小鼠細胞因子elisa試劑盒   小鼠細胞因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠細胞因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠細胞因子試劑盒、小鼠細胞因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

DL-2-Amino-n-octanoic acid  644-90-6  中文名：DL-2-氨基正辛酸  分子式：C8H17NO2  度：98.0%      小鼠狀腺原酸(T3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Diphenhydramine hydrochloride  147-24-0  中文名：鹽酸苯海拉明  分子式：C17H22ClNO  度：98.0%  關鍵詞：    小鼠補體片斷5a(C5a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Dioxopromethazine hydrochloride  15374-15-9  中文名：鹽酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S  度：99.0%      小鼠補體片斷3a(C3a)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

服務流程：

豬托克特諾病毒探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1、根據客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數據、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）