PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f山梨醇含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  3-Aminopiperidine dihydrochloride  334618-23-4  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

色素上皮細胞衍生因子 (PEDF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Peri acid  82-75-7  中文名：周位酸  分子式：C10H9NO3S  度：98.0%   

傘形   10g  4-Aminobenzophenone  中文名：4-氨基二苯甲酮  分子式：C13H11NO  度：99.0%

三乙酸   100g  3-Aminoadamantan-1-ol  702-82-9  中文名：  分子式：C10H17NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

三0酸腺苷酶   英文名稱：   Rat Adenosine iphosphate   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ATP  3-Amino-5-phenylpyrazole  1572-10-7  中文名：3-氨基-5-苯基吡唑  分子式：C9H9N3  度：98.0%

Caudatin  中文名：告達庭  分子式：C28H42O7  度：98.5%  兔單核細胞趨化蛋白-1(rabbit MCP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Ponasterone A  中文名：坡那甾酮A  分子式：C27H44O6  度：98.0%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶-1(rabbit MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Stigmasta-5,8-dien-3-ol  中文名：  分子式：C29H48O  度：%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶-2(rabbit MMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

Tenacissoside F  中文名：通關(guān)藤苷F  分子式：C35H56O12  度：%  兔肌鈣蛋白Ⅰelisa試劑盒   兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒、兔肌鈣蛋白Ⅰ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Ergosterol peroxide  中文名：過氧化麥角甾醇  分子式：C28H44O3  度：96.0%  兔環(huán)0酸腺苷elisa試劑盒   兔環(huán)0酸腺苷試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔環(huán)0酸腺苷試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔環(huán)0酸腺苷試劑盒、兔環(huán)0酸腺苷elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。小鼠高遷移率族蛋白1(HMG-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Daturataturin A aglycone  中文名：  分子式：C28H38O5  度：93.0%

小鼠高遷移率族蛋白(mouse HMGB1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Neochlorogenic acid  906-33-2  中文名：新綠原酸  分子式：C16H18O9 

小鼠高遷移率族蛋白   英文名稱：   High Mobility Group Box protein 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HMGB1  Daturataturin A  133360-51-7  中文名：  分子式：C34H48O10  度：93.0%  關(guān)鍵詞：  曼陀羅屬; 曼陀羅; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠高敏狀腺原酸elisa試劑盒   小鼠高敏狀腺原酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠高敏狀腺原酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠高敏狀腺原酸試劑盒、小鼠高敏狀腺原酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Decanedioic acid  111-20-6  中文名：  分子式：C10H18O4 

小鼠高敏狀腺原酸(u-T3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Daturataturin A aglycone  中文名：  分子式：C28H38O5

極細密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Dimethylolurea  中文名：雙羥甲脲  分子式：C3H8N2O3    豬水通道蛋白4（AQP4）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dihydrotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3    豬瘦素(LEP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dihydrosenkyunolide C  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3    豬食欲素受體(OXR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dihydroisotanshinone II  中文名：  分子式：C18H14O3    豬食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Dihydroisotanshinone I  中文名：  分子式：C18H14O3    豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬髓0脂堿性蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬髓0脂堿性蛋白試劑盒、豬髓0脂堿性蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項：

極細密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。