PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f人轉(zhuǎn)化生長因子α(TGF-α)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Methylanthraquinone  84-54-8  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人主要組織相容性復合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  2-Methylsulfanylpyrimidin-4(3H)-one  5751-20-2  中文名：  分子式：C5H6N2OS 

人主要組織相容性復合體Ⅱ類elisa試劑盒   人主要組織相容性復合體Ⅱ類試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人主要組織相容性復合體Ⅱ類試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人主要組織相容性復合體Ⅱ類試劑盒、人主要組織相容性復合體Ⅱ類 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名：  分子式：C8H7NO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  2-Methylanthraquinone  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2  度：98.0%

人主要組織相容性復合體Ⅰ類elisa試劑盒   人主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人主要組織相容性復合體Ⅰ類試劑盒、人主要組織相容性復合體Ⅰ類 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  2-Methyl-4-nitrobenzoic acid  1975-51-5  中文名：  分子式：C8H7NO4

1-Naphthol  90-15-3  中文名：  分子式：C10H8O    Tween80   250ml

3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol  116539-55-0  中文名：  分子式：C8H13NOS    傘形   10g

tert-Butyl4'-(bromomethyl)biphenyl-2-carboxylate  114772-40-6  中文名：  分子式：C18H19BrO2    Umbelliferone   25g              

N-[2-Isopropylthiazol-4-ylmethyl(methyl)carbamoyl]-L-valine  154212-61-0  中文名：  分子式：C14H23N3O3S    土壤中性0酸酶(S-NP)測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

1-(2-Amino-5-chlorophenyl)-1-(trifluoromethyl)-3-cyclopropyl-2-propyn-1-ol  209414-27-7  中文名：  分子式：C13H11ClF3NO    土壤堿性0酸酶（S-AKP/ALP）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣小鼠凋亡相關(guān)因子elisa試劑盒   小鼠凋亡相關(guān)因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠凋亡相關(guān)因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠凋亡相關(guān)因子試劑盒、小鼠凋亡相關(guān)因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone  150322-73-9  中文名：  分子式：C11H11FO  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠凋亡相關(guān)因子(mouse Fas)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Fludarabine  21679-14-1  中文名：氟達拉賓  分子式：C10H12FN5O4 

小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Cyasterone  17086-76-9  中文名：杯莧甾酮  分子式：C29H44O8  度：99.0%  關(guān)鍵詞：  川牛膝; 蛻皮甾; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  CTU Guanamine  22535-90-6  中文名：  分子式：C17H26N10O4  度：98.0%   

小鼠第八因子相關(guān)抗原elisa試劑盒   小鼠第八因子相關(guān)抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠第八因子相關(guān)抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠第八因子相關(guān)抗原試劑盒、小鼠第八因子相關(guān)抗原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone  150322-73-9  中文名：  分子式：C11H11FO

毛癬菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Deoxycholic acid  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4    豬戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測試劑盒(-PCR法)   48T

Dehydro-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H12O3    豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Dehydrotolvaptan  中文名：  分子式：C26H23ClN2O3    豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒(-PCR法)   48T

Dehydroherbarin  中文名：  分子式：C16H14O5    豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T              

Dehydroepiandrosterone enanthate  中文名：普拉雄酮庚酸酯  分子式：C26H40O3    豬細胞間粘附分子1elisa試劑盒   豬細胞間粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T

注意事項：

毛癬菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。