概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

蛇形毛圓線蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/HLAⅠ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           2-Methylanthraquinone  中文名：2-甲基蒽醌  分子式：C15H10O2 

人軸突生長(zhǎng)誘向因子4elisa試劑盒   人軸突生長(zhǎng)誘向因子4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人軸突生長(zhǎng)誘向因子4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人軸突生長(zhǎng)誘向因子4試劑盒、人軸突生長(zhǎng)誘向因子4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  中文名：  分子式：C16H15NO3  度：98.0%

人軸突生長(zhǎng)誘向因子4(n4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human n4 (Nein 4) ELISA Kit                 2-Methoxystypandrone  中文名：  分子式：C14H12O5 

人軸突生長(zhǎng)誘向因子1elisa試劑盒   人軸突生長(zhǎng)誘向因子1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人軸突生長(zhǎng)誘向因子1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人軸突生長(zhǎng)誘向因子1試劑盒、人軸突生長(zhǎng)誘向因子1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     2-Methyl-4-(2-methylbenzoylamino)benzoic acid  中文名：  分子式：C16H15NO3 

人軸突生長(zhǎng)誘向因子1(n1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human n1 (Nein 1) ELISA Kit  2-Methoxystypandrone  中文名：  分子式：C14H12O5  度：98.0%

Duloxetine hydrochloride  136434-34-9  中文名：鹽酸度洛西汀  分子式：C18H20ClNOS    土壤無(wú)機(jī)0（S-PHOS）含量測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/24樣

Ritonavir  155213-67-5  中文名：利托那韋  分子式：C37H48N6O5S2    土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/24樣           

3-O-Acetylandrostenone hydrazone  122914-94-7  中文名：3-O-乙?；弁?/span>  分子式：C21H32N2O2    土壤纖維素酶（S-CL）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法    50管/24樣

Androstenone hydrazone  63015-10-1  中文名：雄酮腙  分子式：C19H30N2O    土壤酸性0酸酶（S-ACP）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣

3,3-Dimethoxy-5α-androstan-17-one  3591-19-3  中文名：3,3-二甲氧基-5α-雄烷-17-酮  分子式：C21H34O3    土壤中性0酸酶（S-NP）試劑盒   可見(jiàn)分光光度法   50管/48樣小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Cyasterone  17086-76-9  中文名：杯莧甾酮  分子式：C29H44O8 

小鼠第八因子相關(guān)抗原(FⅧAg)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Deoxylapachol  3568-90-9  中文名：  分子式：C15H14O2 

小鼠抵抗素(Resistin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  CTU Guanamine  中文名：  分子式：C17H26N10O4  度：98.0%

小鼠抵抗素(Resistin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Clorofene  120-32-1  中文名：4-氯-2-芐基苯酚  分子式：C13H11ClO 

小鼠抵抗素(mouse Resistin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Gliquidone  中文名：格列喹酮  分子式：C27H33N3O6S

蛇形毛圓線蟲(chóng)探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家Deoxycholic acid  83-44-3  中文名：去氧膽酸  分子式：C24H40O4    Human neonatal thyroid stimulating hormone (N-TSH) ELISA Kit 人新生兒促甲狀腺素(N-TSH)ELISA試劑盒

Timosaponin AIII  41059-79-4  中文名：知母皂苷AIII  分子式：C39H64O13    Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit 人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Diosgenin  512-04-9  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3    HumanEndocrineglandvascularendothelialgrowthfactor,EG-VEGFELISA試劑盒人腺來(lái)源的內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Sarsasapogenin  126-19-2  中文名：菝葜皂苷元  分子式：C27H44O3    組織PIM2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Makisterone A 20,22-monoacetonide  245323-24-4  中文名：  分子式：C31H50O7    humanPepsinogenA,PG-AELISAKit人胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T