PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

韋塞爾斯布朗病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

葡萄糖（Glu）測(cè)試盒   Surface aigen (enzymatic method) test case  p-Anisoin  119-52-8  中文名：對(duì)茴香偶姻  分子式：C16H16O4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

蘋果酸脫氫酶測(cè)試盒（測(cè)血清）   Apple acid dehydrogenase test case (Ce Xueqing)                 3-Acetylcoumarin  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3 

旁分泌的方式分泌血小板源性生長(zhǎng)因子受體β   英文名稱：   Platelet-derived growth factor receptor beta   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PDGF Rβ  Periplocin  13137-64-9  中文名：杠柳毒苷  分子式：C36H56O13 

瘧原蟲(Pm)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Norfloxacin lactate  97867-34-0  中文名：乳酸諾氟沙星  分子式：C19H24FN3O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

凝血酶敏感蛋白-1   英文名稱：   thrombospondin 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TSP-1  Pazufloxacin mesilate  163680-77-1  中文名：甲磺酸帕珠沙星  分子式：C17H19FN2O7S

Amisulpride  71675-85-9  中文名：阿米舒必利  分子式：C17H27N3O4S    is,Hydrochloride   500g

5-Amino-2-methylindole  7570-49-2  中文名：5-氨基-2-甲基吲哚  分子式：C9H10N2    曲拉通X-100   100ml

9-Anthracenylmethyl acrylate  31645-34-8  中文名：丙烯酸-9-蒽甲酯  分子式：C18H14O2    itonX-100   250ml              

Spongouridine  3083-77-0  中文名：阿糖尿苷  分子式：C9H12N2O6    腮腺炎病毒(MuV)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

2-Aminothiazol-4-acetic acid  29676-71-9  中文名：2-氨基噻唑-4-乙酸  分子式：C5H6N2O2S    麻風(fēng)桿菌(ML)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bortezomib  179324-69-7  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4 

小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Boldenone  846-48-0  中文名：寶丹酮  分子式：C19H26O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠γ干擾素elisa試劑盒   小鼠γ干擾素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠γ干擾素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠γ干擾素試劑盒、小鼠γ干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Boldenone acetate  2363-59-9  中文名：寶丹酮醋酸酯  分子式：C21H28O3 

小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Boldenone undecylenate  中文名：寶丹酮十一烯酸酯  分子式：C30H44O3  度：98.0%

小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Manidipine dihydrochloride  89226-75-5  中文名：鹽酸馬尼地平  分子式：C35H40Cl2N4O6  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

韋塞爾斯布朗病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸Cleroindicin F  189264-47-9  中文名：  分子式：C8H10O3  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  臭牡丹; 長(zhǎng)管大青; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISAKit   ELISA.   96T

Cleroindicin E  165197-71-7  中文名：  分子式：C8H14O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  長(zhǎng)管大青; 老鴉煙筒花; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Cleroindicin D  189264-45-7  中文名：  分子式：C8H12O4  度：97.0%  關(guān)鍵詞：  長(zhǎng)管大青; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠皮質(zhì)醇elisa試劑盒   小鼠皮質(zhì)醇試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠皮質(zhì)醇試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠皮質(zhì)醇試劑盒、小鼠皮質(zhì)醇elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Cleroindicin C  183626-28-0  中文名：  分子式：C8H12O3  度：%  關(guān)鍵詞：  長(zhǎng)管大青; 老鴉煙筒花; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠牛血清白蛋白elisa試劑盒   小鼠牛血清白蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠牛血清白蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠牛血清白蛋白試劑盒、小鼠牛血清白蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Cleroindicin B  107389-91-3  中文名：  分子式：C8H14O3  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  紅波羅花; 長(zhǎng)管大青; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠牛小腸堿性0酸酶elisa試劑盒   小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒、小鼠牛小腸堿性0酸酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。