PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在產(chǎn)品產(chǎn)品：

s雞球蛋白A(IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tinidazole  19387-91-8  中文名：替硝唑  分子式：C8H13N3O4S 

雞極低密度脂蛋白elisa試劑盒   雞極低密度脂蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   雞極低密度脂蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞極低密度脂蛋白試劑盒、雞極低密度脂蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Tazobactam acid  89786-04-9  中文名：他唑巴坦酸  分子式：C10H12N4O5S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

雞白介素4elisa試劑盒   雞白介素4試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   雞白介素4試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞白介素4試劑盒、雞白介素4 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Aminoisonicotinic acid  中文名：2-氨基異煙酸  分子式：C6H6N2O2  度：98.0%

雞β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tinidazole  中文名：替硝唑  分子式：C8H13N3O4S 

雞5核苷酸酶elisa試劑盒   雞5核苷酸酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   雞5核苷酸酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：雞5核苷酸酶試劑盒、雞5核苷酸酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Tazobactam acid  89786-04-9  中文名：他唑巴坦酸  分子式：C10H12N4O5S

Mesterolone  1424-00-6  中文名：甲氫睪酮  分子式：C20H32O2    人轉(zhuǎn)移因子(TF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human TF (ansfer Factor) ELISA Kit

Testosterone undecanoate  5949-44-0  中文名：十一酸睪酮  分子式：C30H48O3    人蛋白1(TNPO1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human TNPO1 (anspoin 1) ELISA Kit               

4-Chlorodehydromethyltestosterone  2446-23-3  中文名：4-氯去氫甲基睪酮  分子式：C20H27ClO2    人轉(zhuǎn)鐵蛋白（F）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Cholesterol  57-88-5  中文名：膽固醇  分子式：C27H46O    人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Mefenamic acid  61-68-7  中文名：甲滅酸  分子式：C15H15NO2    人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(T)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠GATA結(jié)合蛋白elisa試劑盒   小鼠GATA結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠GATA結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠GATA結(jié)合蛋白試劑盒、小鼠GATA結(jié)合蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone  3669-41-8  中文名：2,4-二羥基苯基芐酮  分子式：C14H12O3  度：98.0%   

小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Benzoyl-L-histidine  5354-94-9  中文名：苯甲?；?/span>-L-組氨酸  分子式：C13H13N3O3  度：98.0%   

小鼠Fractalkine（mouse Fractalkine）   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Menthyl-5-(4-amino-2-oxo-2H-pyrimidin-1-yl)-[1,3]oxathiolane-2-carboxylic acid  中文名：  分子式：C18H27N3O4S 

小鼠FMS樣酪酸激酶elisa試劑盒   小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒、小鼠FMS樣酪酸激酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Benzoyleneurea  86-96-4  中文名：亞苯甲?；?/span>  分子式：C8H6N2O2  度：98.0%   

小鼠FMS樣酪酸激酶3配體elisa試劑盒   小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒、小鼠FMS樣酪酸激酶3配體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Benzoyleneurea  86-96-4  中文名：亞苯甲酰基脲  分子式：C8H6N2O2

哺乳動(dòng)物源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家Caudatin  中文名：告達(dá)庭  分子式：C28H42O7  度：98.5%  兔單核細(xì)胞趨化蛋白-1(rabbit MCP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Ponasterone A  中文名：坡那甾酮A  分子式：C27H44O6  度：98.0%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶-1(rabbit MMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Stigmasta-5,8-dien-3-ol  中文名：  分子式：C29H48O  度：%  兔基質(zhì)金屬蛋白酶-2(rabbit MMP-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  

Tenacissoside F  中文名：通關(guān)藤苷F  分子式：C35H56O12  度：%  兔肌鈣蛋白Ⅰelisa試劑盒   兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔肌鈣蛋白Ⅰ試劑盒、兔肌鈣蛋白Ⅰ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Ergosterol peroxide  中文名：過(guò)氧化麥角甾醇  分子式：C28H44O3  度：96.0%  兔環(huán)0酸腺苷elisa試劑盒   兔環(huán)0酸腺苷試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔環(huán)0酸腺苷試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔環(huán)0酸腺苷試劑盒、兔環(huán)0酸腺苷elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

哺乳動(dòng)物源性成分探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。