小鼠角膜上皮細(xì)胞【MouseEye:NormalCornealEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：小鼠角膜是唯一的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能。分三層細(xì)胞層，外層即是上皮細(xì)胞。角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng)。角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶，防止UV-和4-羥基壬烯醛對(duì)細(xì)胞造成傷害。公司提供的小鼠角膜上皮細(xì)胞，采用胰酶、中性酶消化制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseEyePrimaCell：NormalCornealEpithelialCellsCatNo.3-4498)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠角膜上皮細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠角膜上皮細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;SW480 [SW 480;SW-480] 大鼠腎管狀上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL6-1酸葡萄糖三鈉鹽D-Gluconate 6-phosphate 3 salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

PC-12(未分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(未分化)奧氮平內(nèi)酰胺雜質(zhì)Olanzapine Lactam Impurity

NEGR1 Others Human 人 NEGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 奧氮平硫代內(nèi)酰胺雜質(zhì)Olanzapine Thiolactam Impurity

人肝癌細(xì)胞;Hep G2 [HepG2]2-羥甲基奧氮平2-Hydroxymethyl Olanzapine

LILRA5 Others Rat 大鼠 LILRA5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) N-去甲基奧氮平N-Demethyl Olanzapine
中國(guó)倉鼠肺細(xì)胞;V79 卵巢癌細(xì)胞，SK-OV-3細(xì)胞 WCF細(xì)胞，團(tuán)頭魴尾鰭細(xì)胞鹽酸洛哌丁胺(標(biāo)準(zhǔn)品)Loperamide HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

人胚胎眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;HFTF酮咯酸氨丁三醇Ketorolac Tromethamine 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP,BR

HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Malaysia/2506/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 酮咯酸氨丁三醇（標(biāo)準(zhǔn)品）Ketorolac Tromethamine 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

原代內(nèi)皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml蘭索拉唑Lansoprazole 質(zhì)量規(guī)格：干品含量>98%,USP32

ACE2 Others Cynomolgus 食蟹猴 ACE2 / Angiotensin-Converting Enzyme 2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 蘭索拉唑（標(biāo)準(zhǔn)品）Lansoprazole 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
S180細(xì)胞，小鼠艾氏腹水瘤細(xì)胞TCM15 MCF-7(人癌細(xì)胞) 猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞;RF/6A苯并-12-冠4-(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)Benzo-12-crown 4-Ether

EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)苯并-18-冠6-(>96.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)Benzo-18-crown 6-Ether

HELF(人胚肺成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)12-冠-4-(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)12-Crown 4-Ether

胎兒表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)15-冠-5-(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)15-Crown 5-Ether

PDE4B Others Human 人 PDE4B / DPDE4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 倍他米 21-醋酸鹽Betamethasone 21-acetate
小鼠角膜上皮細(xì)胞非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2OCTYL-β-D-GLUCOPYRANOSIDE辛基-β-D-葡萄糖苷蛋白組學(xué)級(jí)白色結(jié)晶FROZENsigma

MERTK Others Mouse 小鼠 MERTK / Mer 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 聚氧1硬脂醋酯 BRIJ 700 9002-00-9

CL-0233THP-1(人髓系白血病單核細(xì)胞)5×106cells/瓶×2化啶 Propidium iodide (≥95%, HPLC) 25535-16-4 10MG 染色劑

HUM, 正常人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 小鼠成纖維細(xì)胞，Y2細(xì)胞 NK-92MI(人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細(xì)胞)乙酸-2-奈酯，英文名或英文縮寫：β-Napthyl acetate，級(jí)別：高，98%，無水物，規(guī)格：5克

人急性T細(xì)胞性白血病細(xì)胞;I 2.1(CRL-2572)LoadingBuffer 1ml/5ml 國(guó)產(chǎn)
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。