凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。產(chǎn)品僅供科研使用

參數(shù)規(guī)格：
人呼吸道組織提取物【Airway: Normal Human Airway Derivatives】
產(chǎn)品描述：呼吸道并不僅僅是氣體的通道，能對進入的氣體進行處理，達到肺部氣體的溫暖、濕潤、清潔。公司科技提供來自新鮮或冷凍人呼吸道組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

實驗要點及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。產(chǎn)品僅供科研使用
大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA檢測試劑盒Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 96T/48T 馬來酸阿森那平  Asenapine Maleate  質(zhì)量規(guī)格：>99%

大鼠髓鞘堿性蛋白抗體(MBP aibody)試劑盒 Rat myelin basic protein aibody,MBP aibody ELISA Kit 馬來酸,順丁烯二酸  Maleic acid  質(zhì)量規(guī)格：AR,HPLC>99%

大鼠髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)試劑盒 Rat myelin-associated glycoprotein,MAG ELISA Kit 馬來酸 HPLC≥98% 20mg

大鼠髓系細胞觸發(fā)受體-1(EM-1)ELISA檢測試劑盒RatiggeringReceptorExpressesonMyeloidCells-1,EM-1ELISAKit 96T/48T 馬拉韋若  Maraviroc  質(zhì)量規(guī)格：>99%

大鼠髓系細胞觸發(fā)受體-1(EM-1)試劑盒 Rat iggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1,EM-1 ELISA Kit 馬兜鈴酮 HPLC≥98% 20mg

大鼠髓樣細胞觸發(fā)性受體2(EM2)試劑盒 Rat iggering receptor expressed on myeloid cells 2,EM2 ELISA kit 馬兜鈴酸C HPLC≥98% 5mg

大鼠羧化不全骨鈣素(ucOC)試劑盒 Rat Undercarboxylated Osteocalcin,ucOC ELISA Kit 馬兜鈴酸B HPLC≥98% 20mg

小鼠去甲(NA)ELISA試劑盒 ，英文名： NA ELISA Kit 京尼平甙(標準品)  Geniposide  質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%, 標準品

小鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA檢測試劑盒Mouseiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit 96T/48T 京尼平甙  Geniposide  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

人鈣調(diào)素特異抗體(CAM-ab)試劑盒 Human ai-calmodulin specific aibody,CaM-ab ELISA Kit 甲睪酮; 甲基素  17-Methyltestosterone  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

RatIerleukin12,IL-12/P40ELISAKit大鼠白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 四氫生物蝶呤游離堿  Tetrahydro-L-Biopterin free base  質(zhì)量規(guī)格：>99%
人呼吸道組織提取物小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 甲基綠(~65%,BS)  Methylene green zinc chloride double salt  質(zhì)量規(guī)格：~65%,BS

小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA檢測試劑盒MouseThrombinactivatablefibrinolysisinhibitor,TAFI 96T/48T 亞甲紫3RAX(>90%，BS)  Methylene violet 3RAX  質(zhì)量規(guī)格：>90%，BS

小鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA試劑盒 ，英文名： TAFI ELISA Kit 2-甲基琥珀酸(>98%,BR)  Methylsuccinic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠纖維蛋白原(FG)ELISA試劑盒 ，英文名： FG ELISA Kit 馬來(>98%，植物激素級)  MH, maleic hydrazide  質(zhì)量規(guī)格：>98%，植物激素級

小鼠纖維蛋白原α(FGα)ELISA試劑盒 ，英文名： FGα ELISA Kit 鉬粉(>99%,BR)  Molybdenium powder  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠纖維蛋白原β(FGβ)ELISA試劑盒 ，英文名： FGβ ELISA Kit 二硫化鉬(>98%,BR)  Molybdenium(IV) sulfide  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)ELISA試劑盒 ，英文名： FDP ELISA Kit 1-萘乙酸鈉(>98%,植物激素級)  NAA-Na, 1-naphthaleneacetic acid  salt  質(zhì)量規(guī)格：>98%,植物激素級

小鼠纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)ELISA試劑盒 ，英文名： FGL1 ELISA Kit N-乙酰-DL-纈氨酸(>98%,BR)  N-Acetyl-DL-valine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

小鼠纖維膠凝蛋白1(FCN1)ELISA試劑盒 ，英文名： FCN1 ELISA Kit 1,5-萘二磺酸二鈉鹽(>97%,BR)  Naphthalene-1,5-disulfonic acid di salt  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

小鼠纖維介素蛋白(FGL2)ELISA試劑盒 ，英文名： FGL2 ELISA Kit 1,5-萘二磺酸四水(>98%,BR)  Naphthalene-1,5-disulfonic acid tetrahydrate  質(zhì)量規(guī)格：>98%
收到人呼吸道組織提取物如何處理？
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。