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人前列腺組織提取物
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參數(shù)規(guī)格:
人前列腺組織提取物【Human Prostate : Normal Prostate Derivatives】
產(chǎn)品描述:前列腺是男性特有的性腺器官。前列腺如栗子,底朝上,與膀胱相貼,尖朝下,抵泌尿生殖膈,前面貼恥骨聯(lián)合,后面依直腸,所以有前列腺腫大時,可做直腸指診,觸知前列腺的背面。公司科技提供來自新鮮或冷凍人前列腺組織中高質量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin),離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產(chǎn)品名稱 | 人前列腺組織提取物 |
英文名稱 | Human Prostate : |
貨號 | GOY-Y6867 |
凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明 :
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
產(chǎn)品僅供科研使用1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
大鼠神經(jīng)膠質纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒 Rat glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 曼陀羅萜醇酮 HPLC≥98% 20mg
大鼠神經(jīng)顆粒素(NG/GN)試劑盒 Rat neurogranin,NG/GN ELISA kit 麥珠子酸 HPLC≥98% 5mg
大鼠神經(jīng)生長因子(NGF)試劑盒 Rat Nerve growth factor,NGF ELISA kit 麥芽五糖 HPLC≥95% 100mg
大鼠神經(jīng)生長因子前體(proNGF)試劑盒 Rat Pro-Nerve growth factor,proNGF ELISA kit 麥芽糖醇 Maltitol 質量規(guī)格:>98%
人鈣依賴性胞漿型0脂酶A2(iPLA2)試劑盒 Human iPLA2 ELISA kit 利伐沙班 Rivaroxaban 質量規(guī)格:度≥98%
Ratiercellularadhesionmolecule3,ICAM-3ELISAKit大鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 利伐沙班(標準品) Rivaroxaban 質量規(guī)格:≥98%,標準品
CASPASE-10蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25 阿哌沙班 Apixaban 質量規(guī)格:>98.5%,選擇性活化Ⅹ因子抑制劑
MouseLeukoieneC4,LT-C4ELISA試劑盒小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 哌立福新(KRX-0401) Perifosine 質量規(guī)格:>98%,蛋白激酶B(Akt)信號通路阻斷劑
小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒 ,英文名: HSP-70 ELISA Kit 鹽酸阿那格雷 Anagrelide 質量規(guī)格:>98%
小鼠C反應蛋白(CRP)ELISA檢測試劑盒MouseC-ReactiveProtein,CRPELISAKit 96T/48T 甲磺酸沙奎拉韋 Saquinavir mesylate 質量規(guī)格:>98%
人鈣衛(wèi)蛋白試劑盒 Human Calprotectin ELISA kit 伐地那非三水合鹽酸鹽 Vardenafil trihydrate 質量規(guī)格:>98%,三水合物
RatIerferonα,IFN-αELISAKit大鼠α干擾素(IFN-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 伐地那非三水合鹽酸鹽(標準品) Vardenafil trihydrate 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
CASPASE-10蛋白共沉淀分析試劑盒5 抑氨肽酶,烏苯美司,貝他定,苯丁抑制素 Bestatin,Ubenimex 質量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
MouseLinkerforactivationofTcell,LATELISA試劑盒小鼠T細胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 抑氨肽酶(進口) Bestatin,Ubenimex 質量規(guī)格:>99%,美國進口sc-202975
人前列腺組織提取物PL/Fbn人纖溶酶/纖維蛋白溶酶規(guī)格:48T/96T 毛地黃素 HPLC≥98% 20mg
PLAP人胎盤堿性0酸酶規(guī)格:48T/96T 毛萼結甲 HPLC≥98% 20mg
PLGA人纖溶酶原激活劑規(guī)格:48T/96T 毛鉤藤堿 HPLC≥98% 10mg
PLGF人胎盤生長因子規(guī)格:48T/96T 毛果蕓香堿 HPLC≥98% 20mg
Plg人纖溶酶原規(guī)格:48T/96T 毛蘭素 HPLC≥98% 20mg
PL人胎盤泌乳素規(guī)格:48T/96T 毛兩面針素 HPLC≥98% 20mg
PL人胰脂肪酶規(guī)格:48T/96T 毛蕊異黃酮 HPLC≥98% 20mg
pMHC人肽-MHC復合物規(guī)格:48T/96T 毛蕊異黃酮苷 HPLC≥98% 20mg
PPAR-γ兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ規(guī)格:48T/96T 茅蒼術醇 HPLC≥98% 20mg
PPI人肽基脯氨酰順反異構酶規(guī)格:48T/96T 沒食子兒茶素 HPLC≥98% 20mg
收到人前列腺組織提取物如何處理?
1、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請拍照,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代;若未超過80%,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時,若細胞密度超過80%,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。
