含量測定

赤蘚紅含量的測定方法有重量法、分光光度比色法、高效液相色譜法、示波極譜法、表面增強(qiáng)拉曼光譜。

重量法（仲裁法）

1、方法提要

試樣溶解后，經(jīng)稀釋、酸化、煮沸，并經(jīng)過恒重過濾，再恒重，然后進(jìn)行稱量計(jì)算。

2、儀器試劑

鹽酸溶液：1+49；1+199；儀器、設(shè)備：G4玻璃砂坩堝形過濾器。

3、測定方法

稱取約2.5g 試樣（精確至0.0001g），置于燒杯中，用水溶解后移入250mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。吸取50mL 該溶液，置于250 mL 燒杯中，加熱至沸騰后，加入20 mL 鹽酸溶液(1+49)，再次煮沸，然后用5 mL 水沖洗燒杯內(nèi)壁，蓋上表面皿，在沸水浴上加熱約5h 后，放冷至室溫，用已在135℃±2℃烘至恒量，并冷卻稱量過的G4 玻璃砂芯坩堝，將沉淀物過濾。再每次用15mL 鹽酸溶液(1+199)沖洗，洗滌二次后，再用15mL 水洗一次，將沉淀物和G4 玻璃砂芯坩堝在135℃±2℃恒溫干燥箱中烘至恒量，在干燥器內(nèi)冷卻30min 后稱量。

分光光度比色法

1、方法提要

將試樣與已知含量的標(biāo)樣分別用水溶解后，在最大吸收波長處，分別測其吸光度，然后計(jì)算出試樣的含量。

2、儀器試劑

乙酸銨溶液；赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)樣品（含量≥85.0%）；分光光度計(jì)；比色皿：10mm。

3、測試方法

赤蘚紅標(biāo)樣溶液的配制：稱取約0.25g（精確至0.0001g）赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)樣品，溶于適量水中，移入1000mL 棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取10 mL，移入500 mL 棕色容量瓶中，加乙酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻。

赤蘚紅試樣溶液的配制：稱量與操作方法同標(biāo)樣溶液的配制。

將赤蘚紅標(biāo)樣溶液和赤蘚紅試樣溶液分別置于10mm 比色皿中，同在最大吸收波長處用分光光度計(jì)測定各自的吸光度值，用乙酸銨溶液作參比液。

高效液相色譜法

1、方法提要

食品中的合成著色劑經(jīng)聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時(shí)間定性和與峰面積比較進(jìn)行定量。

利用高效液相色譜法測定食品中合成著色劑的最小檢出量為18ng，當(dāng)進(jìn)樣量為0.025g樣品時(shí)，最低檢出濃度為0.20.72mg/kg。

2、測定方法

將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中，加2mL鹽酸、三正辛胺正丁醇溶液(5%)10～20mL，充分振搖提取，靜置分取有機(jī)相，重復(fù)提取2～3次，每次10mL，直至有機(jī)相無色，合并有機(jī)相，用飽和硫酸鈉溶液洗2次，每次10mL，分取有機(jī)相，放于蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至l0mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混勻，加氨水提取2～3次，每次5mL，合并氨水溶液層(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗 2～3次，分取氨水層加乙酸調(diào)成中性，水浴加熱蒸發(fā)至近干，加水定容至5mL。經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾，取10μL進(jìn)高效液相色譜儀。

高效液相色譜分析參考條件

①色譜柱：YWG-Cl8，10μm不銹鋼柱，4.6mm×250mm。

②流動(dòng)相：甲醇一乙酸銨溶液(0.02 mol/L)(pH4)。

③梯度洗脫：用濃度為20%～35%的甲醇洗脫5min；用濃度為35%～98%的甲醇5min；用濃度為98%的甲醇繼續(xù)洗脫6min。

④流速：1mL/min。

⑤紫外檢測器，波長254nm。

取相同體積樣液和合成著色劑標(biāo)準(zhǔn)使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)峰面積法定量。

示波極譜法

1、儀器試劑

JP一303型示波極譜儀成都儀器廠；三電極系統(tǒng)滴汞電極、飽和甘汞電報(bào)、鉑電極；底液0．25 tool/L乙酸鈉一1 40 mol/L己酸(pH3．6)緩沖液；鹽酸、三正辛胺、正丁醇、正己烷、己酸；飽和硫酸鈉溶液；氨水(2+98)；赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 n~ nlL)。

2、測定方法

極譜條件：取適量上述樣品提取液0．10 1．00mL于10 mL具塞比色管中，加入底液至10 0mL，混勻，倒入電解池中測定。三電極系統(tǒng)，陰極二階導(dǎo)數(shù)掃描．超始電位一350 mv，于一570]TIr~r記錄極譜導(dǎo)數(shù)波高。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：取赤蘚紅標(biāo)準(zhǔn)0．00，0．50，1．0o，2 50，5．0o，10．0，20．0，50 0 ug于10 mL比色管中，進(jìn)行測定。 [3] 

表面增強(qiáng)拉曼光譜法

方法提要

理論計(jì)算拉曼采用密度泛函理論(DFT)在B3LYP/6-31G(d)水平上對(duì)赤蘚紅分子進(jìn)行了構(gòu)型優(yōu)化,赤蘚紅的實(shí)驗(yàn)拉曼光譜與理論計(jì)算拉曼對(duì)比具有很好的對(duì)應(yīng)性。采用金納米顆粒作為表面增強(qiáng)拉曼基底,從赤蘚紅與金膠混合體積比、溶液pH和混合時(shí)間對(duì)檢測條件進(jìn)行優(yōu)化,混合體積比為1:1、pH為5、混合時(shí)間為10min時(shí)赤蘚紅溶液的檢測限可達(dá)到1μg/mL。研究結(jié)果證明以金膠為增強(qiáng)基底的表面增強(qiáng)拉曼光譜法可以快速準(zhǔn)確地鑒定赤蘚紅,為日后檢測常規(guī)食品樣品中的赤蘚紅提供了基礎(chǔ)。