含量的測(cè)定

用于天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯和乙?；前匪岷康臏y(cè)定

滴定法

試劑和材料：苯甲酸:純度≥99%，乙醇，N,N-二甲基甲酰胺；

百里酚藍(lán)甲醇溶液:稱取0.30g百里酚藍(lán)于燒杯中,用甲醇溶解并稀釋至100mL；

四丁基氫氧化銨甲醇溶液:0.1mol/L。

四丁基氫氧化銨甲醇溶液(0.1mol/L)的標(biāo)定:量取10mLN,N-二甲基甲酰胺于錐形瓶中,加入0.05mL百里酚藍(lán)甲醇溶液,用0.1mol/L四丁基氫氧化銨甲醇溶液滴定直至純藍(lán)色產(chǎn)生。立即加入0.2g(精確到0.001g)苯甲酸,攪拌,藍(lán)色消失,在氮?dú)獗Ｗo(hù)下用0.1mol/L四丁基氫氧化銨甲醇溶液滴定直至純藍(lán)色產(chǎn)生。記錄第二次滴定所消耗的滴定液體積(V)。四丁基氫氧化銨甲醇溶液的濃度c1,以摩爾每升(mol/L)計(jì),按式(A.1)計(jì)算:

c1=m×1000/V×M1…………………………(A.1)

式中:

m-苯甲酸的質(zhì)量,單位為克(g);

1000———換算系數(shù);V-第二次滴定所消耗的四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

M1-苯甲酸的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol),[M1(C7H6O2)=122.12]。

儀器和設(shè)備：pH計(jì)或電位滴定儀。

分析步驟：

稱取約0.1g~0.15g試樣,精確至0.001g。置于200mL燒杯中,用50mL乙醇溶解,在氮?dú)獗Ｗo(hù)下,用0.1mol/L四丁基氫氧化銨甲醇溶液滴定,用pH計(jì)或電位滴定儀測(cè)定電位值,記錄第一突躍點(diǎn)和第二突躍點(diǎn)的滴定體積(V1,V2),同時(shí)量取50mL乙醇進(jìn)行空白滴定,記錄體積(V0)。A.4.1.4結(jié)果計(jì)算乙酰磺胺酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1,按式(A.2)計(jì)算:

w1=V1×c1×M2×100%/m1×1000…………………………(A.2)

式中:

V1-試樣中第一突躍點(diǎn)所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

c1-四丁基氫氧化銨甲醇溶液的濃度,單位為摩爾每升(mol/L);

M2-乙?；前匪岬哪栙|(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol),[M2(C4H5NO4S)=163.15];

m1-試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000-換算系數(shù)。

天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2,按式(A.3)計(jì)算:

w2=(V2-V1-V0)×c1×M3×100%/m1×1000…………………(A.3)

式中:

V2-試樣中第二突躍點(diǎn)所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

V1-試樣中第一突躍點(diǎn)所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

V0-空白所消耗四丁基氫氧化銨甲醇溶液的體積,單位為毫升(mL);

c1-四丁基氫氧化銨甲醇溶液的濃度,單位為摩爾每升(mol/L);

M3-天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol),[M3(C14H18N2O5)=294.31];

m1-試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000-換算系數(shù)。

高效液相色譜法

試劑和材料:乙?；前匪?純度≥99.0%；

天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯:純度≥99.0%；

磷酸鉀溶液:稱取5.6g磷酸鉀,加入820mL水,用磷酸調(diào)節(jié)pH=4.3,加入180mL甲醇,混勻,過(guò)0.45μm濾膜,脫氣備用。

甲醇溶液:1+9。

儀器和設(shè)備：高效液相色譜儀:配有紫外檢測(cè)器。

分析步驟

標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

乙?；前匪針?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:1000mg/L,精確稱取0.100g乙酰磺胺酸標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶液定容到100mL,混勻備用。

天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:1000mg/L,精確稱取0.100g天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶液定容至100mL,混勻備用。

乙酰磺胺酸和天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:100.0mg/L,分別吸取乙?；前匪岷吞扉T(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液10.0mL至100mL容量瓶,用甲醇溶液定容,混勻備用。

乙?；前匪岷吞扉T(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液:分別移取乙酰磺胺酸和天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0mL、2.5mL、5.0mL、7.5mL、10.0mL至10mL容量瓶,用甲醇溶液定容,混勻,即得10.0mg/L、25.0mg/L、50.0mg/L、75.0mg/L、100.0mg/L混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。

試樣溶液制備

稱取約0.1g試樣,精確至0.001g。置于100mL燒杯中,用少量甲醇溶液溶解。移入100mL容量瓶中,用甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻。精密量取1.0mL上述溶液,用甲醇溶液定容至10mL,供液相色譜儀測(cè)定,本試樣溶液需現(xiàn)配現(xiàn)測(cè)。

色譜參考條件

色譜柱:C18柱,250mm×4.6mm,5μm,或是同等分離效果的色譜柱。流動(dòng)相:磷酸鉀溶液。檢測(cè)波長(zhǎng):210nm。柱溫:40℃。流速:2.0mL/minA.4.2.3.4測(cè)定分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液和試樣溶液各10μL進(jìn)行液相色譜測(cè)定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算試樣中乙酰磺胺酸和天門(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯的含量。

結(jié)果計(jì)算

試樣中乙?；前匪峄蛱扉T(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w3,按式(A.4)計(jì)算:

w3=c2×V3×f×100%/m2×1000×1000×100%…………………………(A.4)

式中:

c2-從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線得到的乙?；前匪峄蛱扉T(mén)冬酰苯丙氨酸甲酯溶液的濃度,單位為毫克每升(mg/L);

V3-試樣溶液的定容體積,單位為毫升(mL);

f-試樣溶液的稀釋倍數(shù);m2-試樣的質(zhì)量,單位為克(g);

1000-換算系數(shù)。

試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn),結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值與算術(shù)平均值的比值不大于5.0%。