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原位雜交技術(shù)可應(yīng)用于什么方面

1.細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細(xì)胞病毒DNA的檢測。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的檢測。

４.基因在染色體上的定位。

5.檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳

就DNA探針和RNA探針的比較，DNA探針在雜交過程中會出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能，也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體，從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用，將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。

Tips：RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性，其檢測特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進(jìn)行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴(kuò)增的方法，可以更方便地進(jìn)行RNA探針的制備；RNA探針合成后，還需驗(yàn)證其對目標(biāo)片段檢測的靈敏度和特異性。

在選用探針時經(jīng)常會受到可利用探針種類的限制。如在建立DNA文庫時，手頭沒有篩選特定基因的克0隆探針，這時就可用寡核苷酸探針來代替。但必須首先純化該基因的編碼蛋白，并測定6個以上的末端氨基酸序列，通過反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探針。如果已有其它動物的同種基因克0隆，因?yàn)槿祟惡蛣游镩g在同一基因的核苷酸順序上存在較高的同源性，因此可利用已鑒定的動物基因作探針來篩選人類基因克0隆。對于基因核苷酸序列背景清楚而無法獲得克0隆探針時，可采用PCR方法擴(kuò)增某段基因序列，并克0隆人合適的質(zhì)粒載體中，即可得到自己的探針。這種方法十分簡便，無論基因組DNA探針還是cDNA探針都可以容易地獲得，而且，可以建立PCR的基因檢測方法，與探針雜交方法可作對比，可謂一舉兩得。