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原位雜交技術可應用于什么方面

1.細胞特異性mRNA轉錄的定位 可用于基因圖譜、基因表達和基因組進化的研究。

2.感6染組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位，如EB病毒mRNA、人類乳3頭狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測。

3.癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測。

４.基因在染色體上的定位。

5.檢測染色體的變化，如染色體數(shù)量異常和染色體易位等。

6.分裂間期細胞遺傳學的研究，如遺傳病的產(chǎn)前診斷和某些遺傳

多種探針標記檢測系統(tǒng)

基于地高3辛、生物素和熒光標記分子的標記和檢測系統(tǒng)是常見的原位雜交檢測方法。

熒光標記檢測常為直接探針標記方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進行核酸標記。由于標記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過程中的考驗，以及熒光分子易于衰減，其檢測靈敏度受到一定的影響。但對熒光分子的直接檢測呈現(xiàn)的背景較低。

另一種多聚體促進劑是聚丙0烯0酸，用其鈉鹽，濃度為2%～4%。與硫酸葡聚糖相比，其優(yōu)點是價格低廉，粘度低（MW=90 000）。小分子化學試劑酚和Guandine thiocyanate也能促進雜交，它們可能是通過增加水的疏水性和降低雙鏈和單鏈DNA間的能量差異而發(fā)揮作用。酚作為雜交促進劑，只能在低DNA濃度的液相雜交中觀察到，該方法曾被稱為酚乳化復性技術，該法不能用于固相雜交，因酚可引起核酸與膜的非特異吸附作用，即使在液相雜交中的應用也是有限的。而Guandine thiocyanate可通過降低雙鏈DNA的Tm值而起作用。此外，該分子還可以促進RNA的雜交，有裂解細胞而抑制RNase的作用?？傊?，硫酸葡聚糖和聚乙二醇因能用于固相雜交是目前zui常用的雜交促進劑。