武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營(yíng)：動(dòng)植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的取材要求介紹：

實(shí)驗(yàn)小鼠取材要求

采血后，立即將血液放入1.5mL離心管(不需加抗凝劑或防腐劑)。讓血液在室溫下靜置30-60分鐘。在相對(duì)離心力（relativecentrifugalforce，RCF）14000g下離心血樣10-15分鐘，用移液管吸取分離，并轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中?？蓪颖驹?4000g下再離心2-3分鐘，以分離任何剩余的紅細(xì)胞。將分離好的轉(zhuǎn)移到干凈的離心管中。

在進(jìn)行研究前，確定應(yīng)用的探針類型。不同探針類型的優(yōu)劣勢(shì)請(qǐng)見上文描述。DNA探針的制備包括了前期的DNA片段分離純化（或cDNA的）和酶促探針標(biāo)記，可選隨機(jī)引物標(biāo)記法和缺口平移法等。RNA探針的制備包括了轉(zhuǎn)錄載體和轉(zhuǎn)錄法探針標(biāo)記。寡核苷酸探針的制備要求先獲得合成的寡核苷酸片段，再進(jìn)行末端標(biāo)記或加尾法探針標(biāo)記。但無論采用何種標(biāo)記探針及標(biāo)記方法，對(duì)探針標(biāo)記效果需進(jìn)行終的評(píng)估，并準(zhǔn)確計(jì)算探針濃度。

原位雜交過程

雜交前可進(jìn)行預(yù)雜交，以防止較高的背景染色。預(yù)雜交條件與雜交條件相同，只是預(yù)雜交液中不含探針和硫酸葡聚糖。

靶DNA的變性（對(duì)mRNA的原位雜交無需此步）

樣品DNA的變性在DNA-DNA雜交檢測(cè)中是必須的步驟，但同時(shí)可能會(huì)造成樣品形態(tài)學(xué)的部分破壞，此步是實(shí)驗(yàn)中需要優(yōu)化的一個(gè)步驟。常用的變性方法為堿變性和熱變性，實(shí)驗(yàn)時(shí)可以摸索變性時(shí)間、變性溫度等參數(shù)以獲得佳條件。

如使用熱變性方法，可在雜交時(shí)將探針的變性和樣品DNA變性同步進(jìn)行：將樣品和探針溶液加蓋蓋玻片，置于烘箱80℃變性，染色體DNA樣品處理2min，后冷卻至37℃進(jìn)行雜交。組織樣品DNA的變性時(shí)間可增加至80℃10min。