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樣品預(yù)處理

在待測樣品中，DNA或RNA通常都是被蛋白包裹纏繞，根據(jù)不同的細胞和組織樣品的應(yīng)用，可選擇合適的預(yù)處理方法將靶核酸暴露：

內(nèi)源性酶滅活：如果探針的檢測是通過酶促法進行的，則樣品內(nèi)相應(yīng)的內(nèi)源性酶必須被滅活。如內(nèi)源性的POD可通過含1%H2O2的甲醛溶液處理30min。如果檢測酶為AP，可在底物溶液中加入左旋咪唑，AP檢測的內(nèi)源性背景一般來說比POD檢測的低得多，因為在雜交過程中，樣品中內(nèi)源性AP酶的活性基本都喪失了。

RNase處理：在DNA-DNA雜交實驗中，RNase的處理可去除內(nèi)源性RNA，增加實驗的信噪比。在進行mRNA為靶標(biāo)的檢測時，RNase處理的樣品也可作為質(zhì)控對照。通常的處理方式是將DNase-free的RNase溶解于2×SSC(100μg/ml)，樣品在溶液中37℃處理60min。

肝纖維化動物模型

模型概述：

1. 任何可引起肝損傷的因素長期、反復(fù)作用于，均可產(chǎn)生肝細胞變性、壞死，繼而肝和纖維組織，導(dǎo)致肝纖維化。

2. 已有化學(xué)性損傷、性、生物學(xué)、酒精性和營養(yǎng)性肝纖維化模型。每種方法因致病因素不同，給藥途徑不同，產(chǎn)生的機理、纖維化出現(xiàn)早晚、穩(wěn)定性、出現(xiàn)率、重復(fù)性及機體自然患病過程相似程度等都不盡相同。

肝纖維化動物模型造模方法：

1.法：

性肝纖維化產(chǎn)生的機理是Ⅲ型反應(yīng)引起，白蛋白和的大分子物質(zhì)，作為異種抗原進入大鼠體內(nèi)后，刺激其產(chǎn)生相應(yīng)的，當(dāng)抗原再次進人機體后抗原結(jié)合，形成抗原—復(fù)合物(IC)，抗原的反復(fù)、長期刺激，過量的復(fù)合物來不及被清除，沉積于的血管壁內(nèi)外，引起血管炎，造成肝損傷。反復(fù)導(dǎo)致肝細胞變性、壞死，再生，纖維等變化，后發(fā)展為肝纖維化、。

動物選用雄性Wistar大鼠，體重130g左右。取豬0.5ml，腹腔內(nèi)注射，每周2次，共8次(豬的制備：取新鮮豬血，離心制，濾過，分裝放低溫冰箱備用)。

評價:

大鼠第3周出現(xiàn)肝細胞變性、壞死，第4周的膠原纖維形成纖維束，從中央靜脈到門管區(qū)之間相互伸延，發(fā)生纖維化。