

武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司
主營產(chǎn)品: 檢測
思特進(jìn)-動(dòng)物尿液檢測-動(dòng)物尿液檢測公司
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SSC=150mMNaCl,15mM檸檬酸鈉溶液(pH7.4)
HCl處理:對(duì)樣本進(jìn)行20-30min的200mMHCl處理,可將蛋白抽提,并將核酸序列進(jìn)行一定程度的水解,增加雜交檢測的信噪比。
去垢劑處理:如果對(duì)樣品的固定、脫水、包埋等預(yù)處理過程不足以將脂膜成分破壞暴露核酸,可對(duì)樣品進(jìn)行額外的蛋白去垢劑處理(如TritonX-100和SDS)。
蛋白酶處理:樣品中待雜交的核酸序列常與蛋白纏繞交聯(lián)在一起,樣品的固定步驟更是加劇了蛋白的交聯(lián)程度,因此預(yù)滲透是核酸雜交前的常規(guī)步驟,通常通過蛋白酶K的消化作用來完成。根據(jù)不同的文獻(xiàn)來源,蛋白酶K的工作濃度通常設(shè)為10-500μg/ml(溶解于20mMTris-HCl,2mMCaCl2,pH7.4,酶濃度可根據(jù)具體樣品進(jìn)一步優(yōu)化),對(duì)樣品進(jìn)行37°C7.5–30min的處理。染色體涂片或核片的蛋白酶K處理濃度可降至1μg/ml消化7.5min。也有文獻(xiàn)指出,固定石蠟包埋的組織切片樣品,使用胃蛋白酶(500μg/ml,溶于200mMHCl)將得到較好的蛋白消化結(jié)果。

肝纖維化動(dòng)物模型特點(diǎn):
①肝纖維化出現(xiàn)早,出現(xiàn)率高;
②動(dòng)物整體損傷輕微,毛發(fā)、生長情況正常;
③纖維化組織中大量膠原,Ⅲ、Ⅳ型前膠原mRNA增多。
慢性活動(dòng)性患者循環(huán)復(fù)合物多為陽性,豬模型可用于慢性所致肝纖維化的研究,對(duì)于研究復(fù)合物的形成,沉積和清除及對(duì)于防治損傷性肝纖維化有效的篩選,具有意義。
(IDA)發(fā)生的主要原因是由于鐵的攝入不足和/或鐵丟失過多,引起機(jī)體血紅蛋白合成障礙導(dǎo)
致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、雞、貓、狗、猴等,其中以大鼠為常用。
動(dòng)物模型方法:
1. 給予低鐵飲食。飼料含鐵量≥50mg/kg能滿足大鼠的基本需要,低鐵飼料的鐵含量≤10mg/kg,標(biāo)準(zhǔn)飼
料鐵含量為220-270mg/kg。飼料配方以酪蛋白或脫脂奶粉作為蛋白來源,玉米淀粉或蔗糖作為碳水化合物來源,加入植物油,混合維生素和混合無機(jī)鹽配制。
近來通過絡(luò)合劑1%EDTA-2Na除去國產(chǎn)飼料中的鐵,取得滿意的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2. 給動(dòng)物逐次少量放血,造成鐵的慢性丟失。通常采用剪尾的方法,一方面放血不但引起鐵的丟失,而且還可以引起其它營養(yǎng)素的丟失;另一方面剪尾易
引起動(dòng)物而。
3. 低鐵飲食輔以定期少量放血。
