武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營：動植物，細(xì)菌，細(xì)胞生物實(shí)驗(yàn)

武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年，是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司；公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺；可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。

幾丁質(zhì)酶(chitinase)是一種能夠?qū)锥≠|(zhì)水解成N-乙酰葡糖胺的糖苷酶,廣泛存在于植物細(xì)胞中,是抗真菌防衛(wèi)反應(yīng)體系的重要組成部分.該文深入分析了1種三七幾丁質(zhì)酶基因PnCHI1的功能.構(gòu)建PnCHI1的亞細(xì)胞定位載體,轉(zhuǎn)入洋蔥表皮細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),在激光掃描共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)PnCHI1定位于細(xì)胞壁中.構(gòu)建PnCHI1的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)并純化獲得重組蛋白,體外平板抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PnCHI1原核重組蛋白對尖孢鐮刀菌、茄腐鐮刀菌、輪枝鐮刀菌3種三七根腐病菌的菌絲生長具有很強(qiáng)的抑制活性.采用反向遺傳學(xué)技術(shù)驗(yàn)證PnCHI1的功能,通過根癌農(nóng)介導(dǎo)將PnCHI1轉(zhuǎn)入中過量表達(dá).qRT-PCR分析結(jié)果表明PnCHI1在T2代轉(zhuǎn)基因中大量表達(dá),同時(shí)葉片接種實(shí)驗(yàn)顯示PnCHI1轉(zhuǎn)基因?qū)η迅牭毒目剐栽鰪?qiáng)明顯.結(jié)論:PnCHI1是定位于細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)酶,體外能抑制幾種三七根腐病真菌,在過表達(dá)大大提高了對茄腐鐮刀菌的抗性,推測PnCHI1是三七中參與根腐病防衛(wèi)反應(yīng)的重要抗病基因.

大豆[Glycine max(L.)Merrill]是我國主要的糧食作物和油料作物,但土壤鹽漬化成為影響大豆生長和產(chǎn)量的主要限制因素之一。近年來,基因工程技術(shù)被廣泛應(yīng)用于提高植物的耐鹽性,將抗逆基因?qū)雰?yōu)良大豆品種,培育抗逆高產(chǎn)新品系,為解決這一問題提供了新途徑。目前已有多個(gè)耐鹽相關(guān)基因應(yīng)用于植物抗逆研究,其中Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因家族研究較為深入,其主要作用是通過將細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的Na+外排到胞外或者將Na+區(qū)隔化到液泡中,來維持細(xì)胞內(nèi)的Na+穩(wěn)態(tài)和Na+/K+比相對穩(wěn)定,從而減少鹽脅迫對植株造成的傷害。但有關(guān)大豆Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的生物學(xué)功能分析以及應(yīng)用的研究還很少。本研究以超表達(dá)Gm NHX1基因的擬南芥及酵母nhx1缺失突變體為材料,通過非損傷微測技術(shù)、real-time PCR以及酵母互補(bǔ)試驗(yàn),驗(yàn)證Gm NHX1基因的耐鹽功能;借助基因槍法轉(zhuǎn)化洋蔥,觀察Gm NHX1蛋白的亞細(xì)胞定位。在此基礎(chǔ)上,利用根癌農(nóng)介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化法進(jìn)行Gm NHX1基因的遺傳轉(zhuǎn)化。