武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司主營:動植物,細(xì)菌,細(xì)胞生物實驗
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
重金屬轉(zhuǎn)運蛋白P-type ATPase(HMA)已被證實參與植物體內(nèi)的重金屬運輸,HMA5主要參與銅的轉(zhuǎn)運。在模式植物擬南芥、水稻和黃瓜中對HMA5基因進(jìn)行了較多的研究,但是對豆科植物HMA5的研究鮮見報道。實驗室前期在天藍(lán)苜蓿中分離到一個與銅脅迫及共生結(jié)瘤相關(guān)的HMA5基因,為了對此類基因在豆科植物共生結(jié)瘤中的作用進(jìn)行深入研究,本研究對全基因組已測序的模式豆科植物蒺藜苜蓿的基因組進(jìn)行篩查,尋找HMA5同源基因并通過表達(dá)模式分析初步判斷其與共生結(jié)瘤的關(guān)系,在此基礎(chǔ)上,以其中的MTR_8g079250基因為對象,進(jìn)行亞細(xì)胞定位、組織表達(dá)、RNA干擾和過量表達(dá)等研究,初步鑒定該基因在共生結(jié)瘤中的功能。1、MTR_8g079250的亞細(xì)胞定位構(gòu)建MTR_8g079250的洋蔥表皮亞細(xì)胞定位載體,通過基因槍轟擊轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞,在激光共聚焦顯微鏡下觀察到MTR_8g079250::GFP融合蛋白主要在細(xì)胞膜上表達(dá),在細(xì)胞核上也有微量的表達(dá);構(gòu)建MTR_8g079250的葉片亞細(xì)胞定位載體,通過根癌農(nóng)介導(dǎo)注射葉片的方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化,結(jié)果表明目的基因主要定位在細(xì)胞膜和細(xì)胞核上;2、MTR_8g079250的組織表達(dá)構(gòu)建PMTR_8g079250::GUS融合表達(dá)載體,通過農(nóng)發(fā)根轉(zhuǎn)化的方式轉(zhuǎn)入蒺藜苜蓿根部,經(jīng)培養(yǎng)后,進(jìn)行GUS染色觀察。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術(shù)研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實驗中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實驗。
了紅樹植物‘白骨壤’中甜菜堿/脯氨酸轉(zhuǎn)運蛋白基因(BetlProT2),采用根瘤農(nóng)介導(dǎo)的方法,將攜帶有GFP報告基因的35S—Bet/ProT2-GFP融合質(zhì)粒轉(zhuǎn)化洋蔥表皮細(xì)胞,亞細(xì)胞定位分析表明,Bet/ProT2是定位在細(xì)胞質(zhì)膜上的跨膜蛋白。進(jìn)一步利用農(nóng)介導(dǎo)法將Bet/ProT2轉(zhuǎn)人粳稻‘日本晴’,鑒定結(jié)果表明,BetlProT2基因已經(jīng)整合到‘日本晴’的基因組中并有效表達(dá)。轉(zhuǎn)Bet/ProT2基因水稻的耐鹽性明顯提高,在甜菜堿和脯氨酸同時或分別存在的條件下,轉(zhuǎn)基因水稻可以在含有150mmol·L^-1NaCl的液體培養(yǎng)基中正常生長,同時葉片中H2O2含量較低;而野1生型水稻在相同處理條件下出現(xiàn)明顯枯萎,葉片中H2O2大量積累。結(jié)論:紅樹Bet/ProT2基因能通過吸收甜菜堿和/或脯氨酸來降低氧化傷害,顯著提高轉(zhuǎn)基因水稻的耐鹽能力。
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洋蔥(Allium cepa L.)屬百合科蔥屬,是世界主栽蔬菜之一,也是我國主要的出口蔬菜之一。FT(FLOWERING LOCUS T)基因是開花植物光周期反應(yīng)過程中調(diào)控植物成花的關(guān)鍵基因,也是重要的開花整合因子。實驗室在前期工作中已經(jīng)成功了洋蔥的開花素類似基因Ac FT1及Ac LFT,為確定其功能,本試驗分別構(gòu)建了Ac FT1及Ac LFT的正義、反義和RNAi干擾的植物表達(dá)載體,通過凍融法導(dǎo)入到根癌農(nóng)EHA105中,進(jìn)而通過花序侵染法轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中。通過熒光定量PCR法測定Ac FT1及Ac LFT在擬南芥抽薹前葉片中的相對表達(dá)含量,觀察轉(zhuǎn)化植株的形態(tài)學(xué)指標(biāo),繼而確定Ac FT1及Ac LFT在洋蔥成花中的作用,為實現(xiàn)洋蔥抽薹開花的基因調(diào)控提供參考。試驗結(jié)果歸納如下:⑴構(gòu)建了Ac FT1的正義植物表達(dá)載體p Z-Ac FT1,反義植物表達(dá)載體p R-AcFT1,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac FT1;構(gòu)建了AcLFT的正義植物表達(dá)載體p Z-AcLFT,反義植物表達(dá)載體p R-Ac LFT,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac LFT.;⑵利用凍融法將重組質(zhì)粒p Z-Ac FT1、p R-Ac FT1、p RNAi-Ac FT1、p Z-Ac LFT、p R-Ac LFT、p RNAi-Ac LFT導(dǎo)入根癌農(nóng)EHA105中,利用花序侵染法對擬南芥進(jìn)行轉(zhuǎn)化。